敲除细胞系构建常见问题汇总

1、花费时间和经费构建稳定细胞株有必要吗？

答：如果您需要对过表达或者表达降低目的基因的细胞进行反复试验，那么构建稳定细胞株是有必要的。

第一，可以减少不同批次实验中转染效率差异带来的实验结果差异，提高实验的可重复性。

第二，构建好细胞系后不必再进行瞬时转染实验以及反复制备质粒，减少工作量。

第三，不再使用价格高昂的转染试剂，节约实验成本。

2、所有的细胞株都可以构建稳定细胞系吗？

答：不是所有的细胞株都能构建成为稳定细胞系的。构建稳定细胞系需要满足2个条件：1、细胞能稳定传代；2、细胞的转染效率满足要求。我们提供免费的预实验服务，测试您的细胞株是否能用于稳定细胞系构建。

3、实验成功率怎样？

答：我们预实验测试的细胞中90%以上均达到要求并构建成功。

4、你们用什么方法构建稳定细胞株呢？

答：我们是用慢病毒转染的方法构建稳定细胞株的。该系统的特点是目的基因先整合到基因组上再表达，没有瞬时表达过程。因此筛选出的细胞都是稳定整合的。

5、目的基因能稳定表达几代？是否提供传代稳定性数据？

答：慢病毒系统的特点决定了目的基因会像细胞自身基因一样一直表达，不会在传代过程中丢失。我

6、构建好的稳定细胞系如何培养和保存？

答：我们提供的单克隆和多克隆细胞系培养和保存均与原来的细胞株无异，无需抗生素维持。

7、单克隆和多克隆细胞株的区别是什么？

答：单克隆细胞是转染目的基因后经过克隆筛选得到的，由一个细胞扩增形成的细胞株，目的基因整合的位置和拷贝数都是一致的，可以长期维持表达量不变。多克隆细胞是转染目的基因后直接经抗药基因筛选得到的。是多种阳性细胞克隆的混合。需要了解单克隆和多克隆细胞系的资料可以查看我们的单克隆细胞系介绍。

8、如何选择合适的慢病毒载体？

答：选择慢病毒载体主要需要考虑启动子选择、是否需要荧光蛋白标签、荧光蛋白标签是否需要融合表达。常用的慢病毒有plv-puro，plv-egfp-c，plv-egfp（2a）puro。

9、构建细胞株需要多长时间？

答：一般多克隆细胞株需要1个月到1个半月，单克隆细胞株需要2-3个月时间。

10、提供的实验报告包括什么？

答：细胞株构建实验报告、目的基因realtime-pcr检测报告、含有荧光蛋白的细胞提供细胞荧光照片。