非整合型慢病毒的类型包装病毒有哪些
整合酶缺陷型慢病毒(Integrase-deficient lentivirus,简称IDLV),也称为非整合型慢病毒(Non-integrating lentivirus,简称NILV),是一种源自传统慢病毒的新技术。IDLV的整合功能缺失是由整合酶蛋白中的点突变导致的。整合酶没有了功能,原病毒DNA就不能插入细胞基因组,而是作为游离体存在于细胞核中。随着细胞分裂,原病毒DNA被逐渐稀释并丢失。与传统慢病毒相比,IDLV降低了插入诱变的风险,适用于CRISPR基因编辑、iPS干细胞等。
慢病毒滴度是如何测定的?
使用p24 ELISA法测定慢病毒滴度。该方法的三明治免疫试验可测定HIV-1 核心蛋白p24在慢病毒上清液中的含量水平。我们首先在微量滴定板上加入慢病毒样本,然后每孔加入HIV-1 p24捕获抗体进行孵育,并随后添加生物素化的p24二抗以结合p24一抗。此后,样本中加入的辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素可特异性结合生物素化的p24二抗。在最后一步中,加入辣根过氧化物酶底物反应液,经HRP催化产生有颜色的产物。每个孔的颜色深度最终反映了慢病毒样本中的p24含量。使用分光光度计测量的样本吸光度数值与重组HIV-1的 p24标准曲线进行对照,然后被换算为对应的慢病毒滴度。
vectorbuilder
赞 (0)