AAV包装在动物体内表达需要注意哪些关键点?
1. 血清型的选择。AAV的血清型主要由AAV衣壳蛋白的结构所决定,不同的衣壳蛋白结构识别不同的细胞表面受体,因此血清型的选择会影响AAV的感染效率、组织亲和性、和开始表达的时间。
2. 启动子的选择。是选择广谱性启动子还是特异性启动子。相比于血清型的组织特异性,特异性启动子可实现细胞的特异性,因此对特异性要求较高的研究,可以选择某种细胞特异性表达的启动子。
3. 注射方式。对于可以进行局部注射的组织器官,采用局部多点注射靶器官可取得较好的特异性和表达效果。
4. 病毒量及滴度。根据不同的靶器官组织和所使用的不同AAV血清型(扩散能力不同),推荐注射的AAV量不同,传递到组织中的病毒颗粒数量对于感染效果影响很大。但AAV使用量并不是越多越好,过多的量可能出现病毒溢出,而且根据我们的经验,病毒量太多有时候甚至会出现表达降低的情况。想了解具体组织的病毒用量可以联系我们咨询。
5. 检测时间。不同基因的表达高峰时间是不同的,再加上AAV需要从单链DNA变成双链DNA,一般在2周可检测到基因表达,如无抗体产生的影响,基因的表达可持续表达半年以上。
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