细胞增殖检测/MTT或CCK8实验原理
1. MTT法又称MTT比色法
MTT法是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在540 或720nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
2. Cell Counting Kit 简称 CCK-8 试剂盒
CCK-8 试剂盒是一种基于 WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下可以被线粒体内的脱氢酶还原成高度水溶性的黄色甲臜产物。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在 450nm 波长处测定 OD 值,间接反映活细胞数量。CCK-8 目前已广泛应用于高通量药物筛选,细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
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