【直击AACR现场】外泌体领域大牛Thery精彩报告总结，文末附深夜福利 / 四六文摘

作者：邵营宽

外泌体之家ID：游虾

Clotilde Thery 阿姨是外泌体基础功能的主要研究者，在2018年AACR年会中，她以 “Molecular and functional heterogeneity of Extracellular Vesicles: what is specific of exosomes?”为标题做了一些目前外泌体研究中很少有人认真研究的事情，主要参考文献是 PMID: 26858453 和 PMID: 28923825，外泌体来源细胞为DC细胞（下文1-5部分）和乳腺癌细胞。以下主要以个人角度做了一个归纳。

注意

~~文末有Thery大神的现场报告视频哦

这三位外泌体领域的大神从左至右为：

外泌体研究带头人Clotilde Thery；

D Lyden主要合作者Hector Peinado；

把外泌体当做荷尔蒙看待的Muller Fabbri；

（最后这位在讲座中提到目前在夏威夷大学有phd职位提供）

1. 外泌体的离心方法主要还是2006年Thery C（后面统称阿姨）提出的差速离心法+密度梯度离心，但目前即使是超离+密度梯度离心得到的pellet是否可以称为exosomes，阿姨表示需要打上问号。

2. EV中包含的2k 10k离心产物与100k离心获得的所谓外泌体到底有何不同，外泌体在细胞免疫方面的作用是否具有唯一性或者说独特性，以往研究表明似乎是没有的，但针对性的实验一直缺乏。阿姨通过T细胞活化的实验进行了一点解读。主要通过区别不同的EV，和评估他们的功能。

3. 理论上，2k产物应为细胞碎片等，10k应为MV即随机向外释放的大囊泡，100k为30-150nm的外泌体，但实际上，对三组产物进行电镜观察，发现三组互相存在，只是比例有差别而已。这里，阿姨着重提出了电镜观察的重要性，这与之前我们外泌体之家举办的讲座中重点提示的相同，参考高博士当时举的一篇文献，大家可以自行比对自己提取到的外泌体是否是外泌体。笔者在海报区看到一些外泌体TEM图片根本就不是外泌体，而是低密度、高密度脂蛋白，询问了一下基本是沉淀法试剂盒提取的。

4. 之前的各类综述提到的外泌体标志物应该做CD63 CD81 CD9，但2k，10k,100k沉淀产物的标志物如何呢？CD63，CD9，CD81在100K沉淀中富集，但其他几个EV也有；MHCII、HSC70、Flotillin-1、Actin在所有EV中均有，GP96只存在larger EV中。那么具体Marker代表的意思如下：CD9 alone: not endosome-derived sEVs,CD63 alone: Endosome-derived sEVs and large Evs，CD9+CD63+CD81阳性=endosome-derived sEVs=exosomes。所以要想说明你提取的囊泡是exosomes或者sEV，需要CD9+CD63+CD81阳性。

5. 进一步，2k,10,100k的产物对T细胞活化有何不同，结论是所有EV都可以活化T细胞，但小囊泡和中等囊泡诱导成TH1型，大囊泡则是Th2型，这种差异是因为大囊泡表面富含CD40，而小囊泡与中等囊泡表面富含CD80。这篇文章已经发表参考文献2，图片我就不放了。

6. 接着，阿姨讲了讲乳腺癌细胞分泌的外泌体特征，使用了BT-549细胞系，发现了一个很有意思的事情，即在肿瘤细胞中100k沉淀产物与DC细胞的100k沉淀产物有很大不同，CD9，CD63，Syntenin都在外泌体中高度富集，而其他EV均没有。更重要的是，乳腺癌细胞来源EV对免疫细胞分泌炎症因子的效果不同，也进行了检测，在各类炎症因子的分泌中，外泌体的刺激效果是最明显的。这与外泌体的尺寸、内容物这个物质基础存在必然联系。以上或许是肿瘤外泌体研究的最佳消息了！即肿瘤外泌体与免疫细胞外泌体的内容物分布不同，具有特异性。（本条结论对应结果图阿姨不让放）

7. 同时阿姨必然提到另外一位大神D Lyden的近期研究成果，她没有很明确表示支持或反对这种分类方法，但提到外泌体亚型的不同功能非常值得关注，这可能是今后外泌体高分文章的重要趋势。当然区分外泌体不同亚型的方法，目前只有D Lyden报道的不对称流场分离方法。笔者向周围专家询问这种技术的可能性，一位德国的教授表示他们那已经购买了这个仪器，准备开展相关工作了，不得不感慨科研环境的不同造成的速度差异。

8. 最后Thery C大神对目前外泌体研究的火爆非常欣喜，表示大家有机会可以去欧洲参加ISEV的年会，笔者毕竟还是肿瘤研究者，没有机会去欣赏了，若论坛内有大神去，欢迎交流分享。

后记：2018年AACR汇集了全球各路肿瘤研究者与交叉学科研究，用饕餮大餐来形容不为过，一方面欣慰在世界的另一头有人和自己做着一样的事情，另一方面又体会到一阵一阵的压力，之前在讲座中提到的一些外泌体讨论，东亚国家的研究者的海报中基本已经涉及了，时不我待。在公司会展区域，看到的最多是的各种PDX模型，有最传统的PDX瘤块，也有CSC分离后接种，甚至单个CTC细胞的PDX模型；另外，各种单细胞测序技术同台竞技，多色免疫荧光，3D,4D多色标记，甚至lable-free的成像技术，在将来不知哪支会成为主流技术呢。

最后，哪国的研究者都不容易啊，无论是貌若天仙的PHD女神，还是白发苍苍的资深研究员，只有文章才代表了你的深度与厚度。当然，最羡慕的还是那些美国医生，一边发Nature一边赚大钱