巨噬细胞工具小鼠分类

巨噬细胞工具鼠主要分为３类：Cre工具鼠，荧光报告工具鼠和DTR工具鼠。这三类鼠广泛应用在探索巨噬细胞起源，极化和细胞互作等方面，均大大促进了巨噬细胞生物学研究进程。

Cre工具鼠

Cre工具鼠是通过在小鼠marker基因位点敲入Cre/CreERT2或者Dre/DreERT2元件构建而成。Cre工具鼠跟特定的flox小鼠交配，可以实现在巨噬细胞中敲除或者敲入目的基因，完成对基因在巨噬细胞中的功能研究。例如最近中山大学宋尔卫/苏士成组就通过使用Csf1r-cre鼠与IRENA-CKO鼠交配，获得在巨噬细胞中敲除IRENA lncRNA 的敲除小鼠，验证了IRENA在肿瘤巨噬细胞促肿瘤过程中的作用，提供了一个潜在治疗靶点。

图4 巨噬细胞中特异敲除IRENA后增加了肿瘤组织的化疗敏感性[2]

此外，Cre工具鼠也可以通过与荧光报告工具鼠交配，实现谱系示踪的目的。例如Christian Schulz等利用组成性表达Cre的Csf1r-cre鼠及诱导性表达Cre的Csf1r-MeriCreMer与Rosa26-LSL-YFP小鼠交配，获得在Csf1r基因表达的细胞中表达YFP荧光蛋白的小鼠，从而对Csf1r+细胞进行追踪，发现组织定居巨噬细胞起源于卵黄囊来源的Csf1r+细胞。

图5 组织定居巨噬细胞起源于卵黄囊来源的Csf1r+细胞[3]

荧光报告工具鼠

荧光报告工具鼠是通过在小鼠marker基因处敲入报告基因构建而成，可以达到在体内标记巨噬细胞的目的。例如，Juan G等通过使用Lyz2-EGFP小鼠，区分中枢神经系统的小胶质细胞和外周血来源的浸润巨噬细胞，发现缺血性脑卒中后小胶质细胞和巨噬细胞在TNF-α，Arg-1和IL-1β等蛋白表达水平上均有较大差异，而两类细胞共同促进了脑部形态修复和再生。

图6 CD11b+LysM-EGFP+巨噬细胞（箭头）和P2ry12+CD11b+ 小胶质细胞（楔形符号）[4]

DTR工具鼠

DTR工具鼠则是在小鼠marker基因位点敲入DTR（ diphtheria toxin receptor，白喉毒素受体）。当巨噬细胞表达DTR时，白喉毒素的注射将使细胞死亡，从而达到剔除巨噬细胞的目的。因此，DTR工具鼠可以用来研究巨噬细胞在免疫系统中的作用。Borthwick等通过构建CD11b-DTR和CD11c-DTR鼠，证明了在受感染的组织内，是巨噬细胞的剔除造成了2型炎症反应的减弱，而不是树突细胞，究其机制，是因为巨噬细胞剔除后损伤了 CD4+ T 辅助型 2类 (Th2) 细胞归巢和活化。

图7 白喉毒素处理后，CD11b+ F4/80+巨噬细胞数量显著减少[5]