双荧光素酶报告基因检测实验技术流程

双荧光素酶报告基因实验系统采用荧火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成双荧光素酶报告基因实验系统。实验中，报告基因（荧火虫荧光素酶）活力的改变，与基因表达的特定实验条件相关；而示踪基因（海肾荧光素酶）作为内对照，使测试不被实验条件变化所干扰，减少内在的变化因素所削弱的实验准确性，如，培养细胞的数目和活力的差别，细胞转染和裂解的效率等。荧火虫荧光素酶和海肾荧光素酶测试的组合，提供了双遗传报告基因应用的理想测试系统。

启动子与转录因子相互作用检测

转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合，这些特异性的序列被称为顺式因子。转录因子的DNA结合域和顺式因子实现相互结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。

技术流程

启动子与转录因子相互作用检测工作原理
应用领域

• 潜在启动子/启动子核心区域检测；

• 潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测；

• 启动子区可能的转录因子结合位点检测；

• 启动子/增强子与转录因子的相互作用；

• 病毒/细胞相互作用；

• 药物等化学诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）；

• 射线等物理诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）。

miRNA与3’UTR相互作用检测

miRNAs 与靶基因的3' UTR区域特异结合后调节靶基因的表达。当3' UTR靶标序列融合在一个荧光素酶报告基因下游并在体外表达时，miRNA通过与下游3' UTR特异结合从而调节荧光素酶的表达。最后，通过分析荧光素酶的活性，间接了解miRNA的靶标调控作用和特异性。

参考文献
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