组织学技术 固定3

3 固定方法

（1）小块组织直接固定

从人体或实验动物身上取下的小块组织，立即投入固定液固定。

（2）灌注固定法

某些组织块体积过大或固定液极难渗透入组织内部，或对整个脏器甚至整个动物固定

1）局部灌注固定法：

肺：将固定液从气管或支气管注入，不宜太快，用力均匀，量适当，避免胀破肺泡

眼球：从眼后房注入

肝、肾等脏器：从肝、肾动脉注入，并切断其静脉排出血液，充分浸入固定液

脑：动物麻醉，暴露颈动脉，以注射针尖向头部方向注入，液体出口开在颈静脉或左心房上

有时注射前，先将生理盐水洗至无血色为止

2）全身灌注灌注固定法

较大动物如兔、猫、狗、猴及整个人体：从一侧颈总动脉或股动脉输入固定液，从另一侧切开静脉放血

兔、猫  500~1000毫升

狗、猴 1000~2000毫升

较小动物如大、小鼠：吸入乙醚，深度麻醉。打开胸腔，纵向切开心包膜，用纱线在动脉弓下打一松结。用50毫升注射器和适当的针头，从在心室向主动脉方向刺入，针尖刺入后，随手将纱线扎紧固定；在右心房开一孔放血。

先用与动物等浊的生理盐水慢慢注入血管，洗涤，流出的液体不见血色，再注入固定液至全身完全分布。

取下组织块或整个器官或整个动物，投入固定液固定。

（3）蒸汽固定法

锇酸或甲醛蒸汽。

较细小而薄的标本。

主要用于血液涂片或细胞涂片及某些薄膜组织等的固定

血涂片锇酸蒸汽固定法：

血涂片未干，将事先准备的有盖培养皿滴入1~2%锇酸水溶液2~3滴，放入血涂片30~60秒，水洗，染色，封片。

4 注意事项

组织块大小不超过15×15×5毫米。

固定液的量一般是组织块大小的20~50倍，并在瓶底垫脱脂棉或几层滤纸，使固定液能充分渗入到组织内部。

选择合适的固定液，渗透力强，不使组织过度收缩或膨胀

特殊要求的组织选择特殊的固定液，如胰岛细胞（豚鼠）用Helly液

固定时间：与固定剂、气温、组织块大小有关。温度高，时间短；组织块大，时间长。

软组织或较大组织，先固定2~3小时后再修成小块（纵断、横断、矢状，切面）再换新液固定

5  固定后处理

（1）水溶性固定液：用流水冲洗，如10%甲醛液，含重铬酸钾固定的组织等

（2）酒精溶性固定液：如FA液，Carnoy液，Susa液，Bouin液，10%甲醛短时固定，可低一级的酒精脱水或洗涤

（3）含 钙组织如股骨，甲醛固定后用脱钙剂如硝酸、盐酸、蚁酸、三氯醋酸、乙二胺四乙酸（EDTA）等将组织内的钙脱掉

（4）含升汞固定的组织，流水冲洗，逐级转入70~80%酒精，再加入少量碘酒，等棕色消失后继续加入，直到酒精呈极浅的棕色。最后用5%硫代硫酸钠水溶液去碘。（脱汞去碘）