超实用的丁酸梭菌产品抗逆性分析

丁酸梭菌作为益生菌队伍中优秀的一员，在目前替抗大潮中起到了极其显著的作用。丁酸梭菌添加到饲料中也好，直接饲喂动物也好，首先要接受胃液和肠液的考验，动物胃液pH值一般在1.6-3.0，小肠中胆盐浓度一般不高于0.3%（即0.3g胆盐每100mL），本试验选取根源生物生产的三批次丁酸梭菌产品，做了耐酸性和耐胆盐性分析，为丁酸梭菌产品的科学合理利用提供一定的参考。

01 试验方法

1.1

耐酸性

1）人工胃液的制备：取稀盐酸16.4 mL加入800 mL无菌水中，加胃蛋白酶10 g，摇匀后加无菌水至1000 mL，调节pH值2.0备用。

2）称1.0000 g样品，加入99 mL配置的人工胃液至250 mL三角瓶内中（内有适量的玻璃珠），37℃，200 r/m恒温震荡60 -120 min；同时做无人工胃液的空白对照，分别测定菌量。菌存留率=人工胃液处理后的菌量/空白菌量×100%。

1.2

耐胆盐性

1）PBS缓冲液：氯化钠8 g，氯化钾0.2 g，磷酸氢二钠（十二水）3.63 g，磷酸二氢钾0.24 g，纯净水1000 mL。用6mol/L的盐酸调pH至6.8，121℃灭菌30 min，备用。

2）3%胆盐母液制备：取3.0 g胆盐，用100 mL生理盐水溶解，121℃灭菌20min ，冷却，备用。

3）含胆盐0.3% PBS液的制备：在90mL pH 6.8的PBS溶液中加入10 mL的3%胆盐溶液，涡旋混匀。

4）称1.0000 g样品，加入99mL配置的0.3%胆盐溶液到250 mL三角瓶（内有适量的玻璃珠），37℃，200 r/min恒温震荡240-360min；同时做无胆盐溶液的空白对照，测定含菌量。（以不加胆盐的为空白对照，计算菌存留率）

02试验结果

表1 三个样品经过酸处理和胆盐处理后的菌存留率

三个样品经pH2.0的人工胃液处理1h后，菌存留率平均为86.42%；处理2h后，菌存留率平均为82.71%，略有下降。样品经0.3%的胆盐处理4h和6h后，普遍好于酸处理的，处理6h后菌存留率平均为89.35%。

03 结论  

丁酸梭菌是严格厌氧菌，在动物肠道氧气含量少的大肠端发挥作用，如何保证丁酸梭菌产品过胃、过小肠后还能正常发挥作用呢，评价其抗逆性是必须的。根源生物丁酸梭菌产品经pH2.0的人工胃液37℃下处理1-2h，菌存留率82%以上；0.3%的胆盐溶液中37℃处理6h，菌存留率高达89.35%。根源丁酸梭菌产品比市场同类产品有较好的抗逆性，可放心在动物中使用。