NASH小鼠模型构建技术原理

给予动物高脂、高糖饲料喂养建立的脂肪肝模型，其主要发病机制是营养过剩，食物中脂类、胆固醇和（或）糖类过量，无法完全吸收利用，脂类堆积于肝而引发脂肪肝，进一步出现肝炎性改变及纤维化。该模型与人类非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）相似，是最常见的NAFLD动物模型。

构建策略

使用Gubra-Amylin NASH (GAN) 饲料，即高脂高胆固醇高果糖饲料（40%脂肪供能、20 %果糖和2%胆固醇）喂养小鼠26周以上（一般16周开始出现脂肪变性，26周形成NASH，26~32周诱导出纤维化）。

模型验证

1  体重及血生化检测

图1. 使用GAN高脂高胆固醇高果糖饮食诱导的NASH模型的体重及血生化检测。将野生型C57BL/6雄鼠随机分为2组，每组10只，分别用标准饲料（control组）和高脂、高胆固醇、高果糖饲料（NASH组）喂养，在不同时间点检测各项指标：(A)体重；（B）6h空腹血糖值；（C）血清谷丙转氨酶（ALT）浓度；（D）血清天冬氨酸转氨酶（AST）浓度；（E）血清总胆固醇（TC）浓度。数据以Mean±SEM呈现。使用Two-way ANOVA进行统计学分析。ns: not significant, *: p<0.05, **: p<0.01, ***: p<0.001, ****: p<0.0001。

结果显示：建模30周时，NASH组小鼠的体重、6h空腹血糖值、血清中ALT、AST和TC浓度均显著高于对照组。

2  肝重量、肝重占体重的比值、肝组织体积检测

图2. 使用GAN高脂高胆固醇高果糖饮食诱导的NASH模型的肝组织检测。从造模后第16周开始，每个时间点取2只同批次对照组和NASH组小鼠进行解剖观察，检测各项肝指标：（A）肝重量;（B）肝重/体重；（C）饲养26周后小鼠的肝组织。数据以Mean±SEM呈现。使用Two-way ANOVA进行统计学分析。ns: not significant, *: p<0.05, **: p<0.01, ***: p<0.001, ****: p<0.0001。

结果显示：与对照组相比，NASH组小鼠的肝重量、肝重占体重的比值、肝组织体积均有升高。

3  肝组织病理切片及NAS评分

图3. 使用GAN高脂高胆固醇高果糖饮食诱导的NASH模型的病理切片及NAS评分。

饲养26周后小鼠的肝组织病理切片：（A）正常对照组小鼠肝小叶结构清晰、完整，肝细胞以中央静脉为中心，呈放射状排列,无肝细胞气球样变或炎症细胞浸润；（B）NASH组小鼠的肝组织小叶结构紊乱，大泡性脂滴占了总细胞的2/3以上，出现严重的脂肪变性, 局部以浸润为主的局灶坏死性炎症；红色箭头：脂肪变性；蓝色箭头：气球样变；（C）NASH组小鼠的肝纤维化可以达到F2级标准（moderate中度纤维化）；红色箭头：纤维化 ；（D）NAS评分。数据以Mean±SEM呈现。使用Two-way ANOVA进行统计学分析。ns: not significant, *: p<0.05, **: p<0.01, ***: p<0.001, ****: p<0.0001。Scale bar = 100 µm。

肝组织病理切片结果显示：造模26周后，与对照组相比，NASH组小鼠的肝组织出现了明显的脂肪变性、气球样变与纤维化。此外，NASH组小鼠的NAS评分从造模后第16周开始，均达到了5分，与对照组差异显著，NASH小鼠造模成功。