同位素未标记13C标记和2H标记的2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）处理拟南芥属T87细胞

同位素未标记13C标记和2H标记的2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）处理拟南芥属T87细胞

该研究使用未标记、13C标记和2H标记的2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）处理拟南芥属T87细胞，经液相色谱高分辨质谱分析后进行特征峰识别和配对同位素峰过滤，得到83个候选代谢物，确认了26个2,4-D的代谢物，其中包括10个已报道代谢物和16个新发现的代谢物。

图1 T87细胞中2,4-D代谢物研究策略

该研究共包括三个数据集：1、未加药组和2,4-D给药组；2、2,4-D给药组和13C8-2,4-D给药组；3、2,4-D给药组和2H5-2,4-D给药组，每组细胞样品均在加药0、1、3、7和10天时间点取样分析。经质谱分析后数据集1得到30853个特征峰，扣除未加药组内源性特征峰并进行35Cl/37Cl同位素表型分析后，得到潜在代谢物645个，但这其中仍可能包含大量假阳性结果；数据集2得到34559个特征峰，对2,4-D给药组和13C8-2,4-D给药组在0、1、3、7和10天时间点的特征峰峰面积轮廓进行统计分析（火山图分析，log2-fold change>|1|和p<0.05）排除内源性代谢物，得到差异特征峰1626个，再进行同位素特征峰配对过滤（Δm/z 8.0272 Da，质量偏差＜5ppm），得到候选代谢物81个；数据集3分析处理流程与数据集2相同，得到候选代谢物76个。综合数据集2和数据集3数据，总共得到候选代谢物83个，三个数据集分析流程见图2。

对83个候选代谢物进行了鉴定，通过Metabolizer软件预测了2,4-D可能的所有代谢反应和代谢产物，包括Ⅰ相代谢（氧化/脱烷基化/羟基化）和Ⅱ相代谢（葡萄糖醛酸结合/氨基酸结合/谷胱甘肽结合/硫酸结合）反应，得到7029个推测代谢物。将83个候选代谢物高分辨质谱数据与推测代谢物进行比对（质量偏差＜5ppm），鉴定得到了26个代谢物，其中包括10个已报道代谢物和16个新发现的代谢物。通过二级质谱特征离子先终确证了16个新发现代谢物的结构。图3为推测的2,4-D在T87细胞内的代谢途径和代谢物随时间变化的代谢轮廓。

73565-87-49,11,12,12-氢化可的松-D4Cortisol-9,11,12,12-d4

349554-00-3依那普利拉-D5Enalaprilat-d5

89778-26-7托瑞米芬-D6Toremifene-d6

1632484-77-5色瑞替尼-D7Ceritinib-d7

220620-09-7替加环素-D9Tigecycline-d9

163165-75-1阿特拉津-D5Atrazine-d5

1346599-45-8阿齐沙坦-D5Azilsartan-d5

871700-17-3UN曲美替尼-D4Trametinib-d4

1132654-54-6鲁拉西酮-D8盐酸盐Lurasidone-d8 hydrochloride

934295-48-4雷贝拉唑-D4Rabeprazole-d4

1185242-90-3霉酚酸-D3Mycophenolic acid-d3

瑞博西尼-D6Ribociclib-d6

352431-33-5曲安奈德-D7Triamcinolone acetonide-d7

350818-67-6盐酸金刚乙胺-D4Rimantadine-d4 hydrochloride (ethyl-d4)

1356383-11-3精氨酸加压素-D5Arginine vasopressin-d5

1219798-89-6氢氯噻嗪-D2Hydrochlorothiazide-3,3-d2

1398044-48-8利格列汀-D3Linagliptin-d3

121679-13-8UN纳拉曲坦-D3Naratriptan-d3

1353867-92-1阿苯哒唑-D3Albendazole-d3

1185240-53-2苯芴醇-D18Lumefantrine-d18

1015856-57-1诺氟沙星-D5Norfloxacin-d5

1216601-32-9依诺沙星-D8Enoxacin-d8

美托拉索-D7Metolazone d7

851528-09-1利多卡因-D10Lidocaine-d10

1185039-30-8格列齐特-D4Gliclazide-d4

1185179-33-2阿昔洛韦-D4Acyclovir-d4

1219805-53-4金刚烷胺-D6Amantadine-d6

338-69-2UND-丙氨酸-D7D-Alanine-d7

53795-92-9DL-丙氨酸-2,3,3,3-D4DL-Alanine-2,3,3,3-d4

L-Alanine-2,3,3,3-d4

74280-71-0L-丙氨酸-D7L-Alanine-d7

15595-35-4UNL-精氨酸盐酸盐-D4L-Arginine:HCL-d4

204244-77-9L-精氨酸盐酸盐-D7L-Arginine:HCL-d7

5794-13-8UNL-天冬酰胺水合物-D3L-Asparagine:H2O-d3

3842-25-9L-天冬氨酸-D3L-Aspartic acid-d3

14341-75-4DL-天冬氨酸-D3DL-Aspartic acid-d3

L-瓜氨酸-D7L-Citrulline-d7

372-75-8UNL-瓜氨酸-D4L-Citrulline-d4

372-75-9UN

52-90-4UNL-半胱氨酸-D3L-Cysteine-d3

130633-02-2L-半胱氨酸-D2L-Cysteine-d2

124051-54-3DL-半胱氨酸-D2DL-Cysteine-d2

L-胱氨酸-D4L-Cystine-d4

14341-79-8DL-谷氨酸-D5DL-Glutamic acid-d5

2784-50-1L-谷氨酸-D5L-Glutamic acid-d5

56-86-0UNL-谷氨酸-D3L-Glutamic acid-d3

96927-56-9DL-谷氨酸-D3DL-Glutamic acid-d3

14341-78-7L-谷氨酰胺-D5L-glutamine-d5

4896-75-7甘氨酸-D2Glycine-d2

4896-77-9甘氨酸-D5Glycine-d5

73-32-5UNL-异亮氨酸-D10L-Isoleucine-d10

L-Leucine-d3

106972-44-5L-亮氨酸-D10L-Leucine-d10

29909-01-1DL-亮氨酸-D10DL-Leucine-d10

92751-17-2L-亮氨酸-D7L-Leucine-d7

657-26-1UNL-赖氨酸二盐酸盐-D4L-Lysine:2HCL-d4

617-68-5UNDL-赖氨酸二盐酸盐-D4DL-Lysine:2HCL-d4

L-赖氨酸二盐酸盐-D9L-Lysine:2HCL-d9

L-Ornithine:HCL-d6

3184-13-2UNL-鸟氨酸盐酸盐-D4L-Ornithine:HCL-d4

3184-13-3UNL-鸟氨酸盐酸盐-D2L-Ornithine:HCL-d2

1069-31-4UNDL-鸟氨酸盐酸盐-D7DL-Ornithine:HCL-d7

L-鸟氨酸盐酸盐-D7L-Ornithine:HCL-d7

54793-54-3L-苯丙氨酸-DL-Phenylalanine-d

150-30-1UNDL-苯丙氨酸-DDL-Phenylalanine-d

221346-31-2L-苯丙氨酸-D2L-Phenylalanine-d2

17942-32-4L-苯丙氨酸-D8L-Phenylalanine-d8

362049-55-6D-苯丙氨酸-D5D-Phenylalanine-d5

56253-90-8L-苯丙氨酸-D5L-Phenylalanine-d5

284664-89-7DL-苯丙氨酸-D5DL-Phenylalanine-d5

65807-21-8DL-脯氨酸-D7DL-Proline-d7

65807-22-9L-脯氨酸-2,5,5-D3L-Proline-2,5,5-d3

39063-89-3L-脯氨酸-D7L-Proline-d7

70094-78-9DL-丝氨酸-D3DL-Serine-d3

105591-10-4L-丝氨酸-D3L-Serine-d3

95034-57-4L-丝氨酸-D2L-Serine-d2

72-19-5UNL-苏氨酸-D5L-Threonine-d5

73-22-3UNL-色氨酸-D8L-Tryptophan-d8

1202359-57-6D-色氨酸-D5D-Tryptophan-d5

62595-11-3L-色氨酸-D5L-Tryptophan-d5

556-03-6UNDL-酪氨酸-3,3-D2DL-Tyrosine-3,3-d2

72963-27-0L-酪氨酸-3,3-D2L-Tyrosine-3,3-d2

130551-49-4L-酪氨酸-D7L-Tyrosine-d7

60-18-4L-酪氨酸(RING-2,6-D2, 2-D)L-Tyrosine(ring-2,6-d2, 2-d)

DL-酪氨酸(RING-3,5-D2)DL-Tyrosine(ring-3,5-d2)

30811-19-9L-酪氨酸(RING-3,5-D2)L-Tyrosine(ring-3,5-d2)

62595-14-6L-酪氨酸(RING-D4)L-Tyrosine(ring-d4)

L-缬氨酸-2,3-D2L-Valine-2,3-d2

203784-63-8DL-缬氨酸-D8DL-Valine-d8

L-缬氨酸-3-DL-Valine-3-d

1337883-32-5DIZPK

66148-15-0烟酸-D4Nicotinic-d4 acid

118584-54-6维生素 D3-D6Vitamin D3-26,26,26,27,27,27-d6

α-生育酚-D6

66034-51-3D-葡萄糖-1,2,3,4,5,6,6-D7D-Glucose-1,2,3,4,5,6,6-d7

285979-70-6氯化胆碱-1,1,2,2-D4Choline-1,1,2,2-d4 chloride

67034-83-7脱氢表雄酮-D2Dehydroepiandrosterone-16,16-d2

60816-17-3胆固醇-26,26,26,27,27,27-D6Cholesterol-26,26,26,27,27,27-d6

127684-08-67-酮基胆固醇-D77-Ketocholesterol-25,26,26,26,27,27,27-d7

61574-54-7妊娠烯醇酮-D4Pregnenolone-d4

91318-10-4己烯雌酚-D8Diethylstilbesterol-d8

胆固醇-D7Cholesterol-d7

53866-34-5雌酮-D4Estrone-2,4,16,16-d4

15775-74-34-烯-3,20-二酮-D9Progesterone-d9

1354782-02-7N-甲基-2'-脱氧腺苷-D32'-Deoxy-n-methyladenosine-d3

24897-52-7尿嘧啶-D2Uracil-5,6-d2

106391-24-6胞嘧啶-D2Cytosine-5,6-d2

40632-25-5胞苷-5,6-D2Cytidine-5,6-d2

334473-41-5二氢尿嘧啶-D4Dihydro Uracil-d4

37621-57-11-溴萘-D71-Bromonaphthalene-d7

93951-84-92-氯萘-D72-Chloronaphthalene-d7

wyf 12.24