化学发光免疫分析与荧光免疫分析的差别
在体外诊断领域,化学发光免疫分析CLIA与免疫荧光分析IFA都是常用的检测方法,最终也都是以光度计进行检测,不过两者的原理是有本质区别的。
化学发光免疫分析相比于放射免疫、荧光免疫、酶联免疫,这种方法更有优势,它具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作简便、不需要十分昂贵的仪器设备等特点,而且无辐射、标记物有效期长并可实现全自动化。
化学发光试剂吖啶酯
化学发光免疫与荧光免疫区别:
虽然两者都是发光反应,最直观的区别就是,化学发光是试剂自身发光,而荧光是用光源照射(通常是紫外线)后再发光。两者的发光原理是不一样的,因此检测的结果也会产生差异。
化学发光是利用化学反应产生的能量促使产生能级跃迁,从而发光,典型的如鲁米诺检测血迹;荧光是一种光致发光现象,必须提供光源去激发分子产生能级跃迁,进而发光。
化学发光比荧光免疫干扰小:
使用这两种方法进行免疫分析时,区别很明显,化学发光无需外加光源,背景干扰小;而荧光则需要外加光源,在垂直光源的方向上检测,生物样品中的蛋白质、氨基酸等分子也会产生背景荧光,背景稍高一些,需要选择合适的荧光试剂,以及样品处理方法以减少非特异性吸附蛋白的影响。
直接法是每个抗原的抗体都要荧光标记,而且荧光标记后可能会影响抗体效价甚至失效。间接法只要对相应的抗原做出相应的抗体,再用标记好的二抗结合上就行了,不用每个抗体都要荧光标记,而且对一抗的效价影响甚微。化学发光干扰很小,特异性非常高,整个方法的使用受到化学分析本身不特异性的制约。磁珠材料的发展使化学发光技术的发展越来越成熟。
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