微生物实验基础操作及常见问题解析【答疑·三】
请查收今日份的知识
答疑·三
2月23日下午王珍老师的“微生物实验基础操作及常见问题解析”网络公开课，第三部分课后答疑来喽，请查收！
1、水中大肠菌群根据GB/T5750.12大肠菌群用五管法，若未检出，该怎样报告？
《GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标》标准中2.1.6结果报告中有提到“如所有乳糖发酵管均为阴性时，可报告总大肠菌群未检出”
2. 无纺布怎么灭菌呢？
可以将无纺布放入蒸汽灭菌专用袋121℃，30min高压蒸汽灭菌、也可臭氧杀菌消毒机灭菌或环氧乙烷灭菌。
3、 关于菌种的保存温度应该多少度，有没有相关标准要求？
常用的菌种保藏方法有冻干保藏法、深低温保藏法、液氮保藏法、矿油封藏法、固体曲保藏法、砂土管保藏法、琼脂穿刺保藏法等。日常工作中，常选用4℃冰箱进行短时间的菌种保藏。冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃，-60—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法，其中最常见的是甘油管冷冻保藏法，现在出现了瓷珠冷冻保藏效果也很好，相对来说冷冻保存较低温（4℃）保存时间更长。
标准请参见：SN/T 2632-2010 《微生物菌种常规保藏技术规程》
4、有没有针对食品包材的微生物检测呀？
GB 4806.8-2016 食品安全国家标准 食品接触用纸和纸板材料及制品
5、 冷冻的慕斯蛋糕应该怎么取样检测？
对大块冷冻食品，应从几个不同部位用灭菌工具抽样，使之有充分的代表性。如果说是检测时的取样则根据要求解冻后取蛋糕涉及的几个部位包括夹心层，比如上中下左右取样。
6、灭菌时培养基的橡胶塞有时会冲出锥形瓶是什么原因？
橡胶塞密封性好但不透气，当瓶子塞太紧，灭菌升温和降温过程中，容器内外压力会有差异，当瓶内压力大于瓶外压力时可能使橡胶塞冲出。因此，灭菌时要选硅氟塞或硅胶塞，不选橡胶塞，盖子不要塞太紧，灭菌后等压力和温度降下后再开盖。
7、 实验室SOP是什么？
标准操作规程的简称SOP（Standard Operating Procedure）。
8、如何在培养后计数前加TTC
在生物安全柜内打开平皿，将0.5%-1%的TTC约0.5-1毫升滴到平皿上，放置一段时间15min-30min，菌落会显粉色至红色，杂质不变色。
9、请问老师，菌落计数实验，十的负一次方，两个平板读数为“0”、“1”，请问最终报告应该报多少CFU/g？
结果报告5和<10都可以。各实验室可以自己规定，但需要统一报告方式，并形成作业指导书。我们实验室作业指导书规定出现这种情况报告<10。
10、第一次不合格，第二次不合格，第三次合格了但是没有污染，怎么出报告？
微生物是不得复检的，对试验过程有异议时可以对结果进行复核，在排除检测过程没有任何污染或干扰时，按第一次结果。
11、在超净工作台内检测不开酒精灯可以吗？
依据你的实验类型而定，超净工作台只有单向气流，而酒精灯的目的也不是提供一个无菌区，而是灼烧瓶口等部位进行灭菌，防止灰尘落入瓶中。如果操作中需要灼烧瓶口或接种针等，当然是需要酒精灯的，不然的话可以不用酒精灯。
12、北方无菌室的湿度低于最低标准应该怎么控制？
无菌室的HVAC系统本身自带有控温控湿的功能。在建造时就应符合GB 50591-2010 《洁净室施工及验收规范》标准。
13、请问下在大肠菌群报告结果时是否也是安装保留两位有效数字进行呢？
是的,GB 4789.2中菌落总数计数中明确说明最后结果保留两位有效数字，GB 4789.3中大肠菌群计数最后结果虽然没有明确说明，但在计数举例中已有举例说明。
14、请问凉茶浓缩汁取样可以1毫升+9毫升稀释液吗？这样与国标的25+225毫升是否合格?
不可以。第一个稀释度取样一定要取25毫升。
15、霉菌培养箱经常会使接种平板受到污染，怎么解决？
16、霉菌的鉴定有详细的介绍吗?
依据GB 4789.16-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 常见产毒霉菌的形态学鉴定。推荐一本书《医学真菌检验与图解》
17、菌落多次做不合格，为什么过段时间又合格了？
原因可能有五：第一，微生物在食品中分布是不均匀的，生长情况因环境条件会发生变化；第二，如果是加防腐剂或是碳酸饮料类，在刚刚配制好的溶液可能含较高的微生物，但放置一段时间后，添加剂发挥作用，微生物被抑制或杀死，这时检测结果可能又合格了。第三，实验可能污染。第四、取样不均匀。第五，样品储存时间和条件发生变化，微生物衰亡，如反复冻融等。
18、在计算时，最后的四舍五入出结果不太明白
举个简单的例子，若两块平板结果平均数为75.5，则四舍五入结果为76，不同的梯度看下表
19、请问大肠MPN法和滤膜法检测结果有多大的差异范围是合理的？
滤膜法的结果单位为CFU，CFU和MPN之间没有直接的关系，不能换算，目前我们还未获得该方面的数据积累，差异范围需要实验室自己通过实验比对研究获得。
20、还有出结果时，10稀释和100倍稀释的结果差不多，该怎么选择出数呢，例如10倍数为3和4，100倍数为2和1，这样的结果算有问题吗，该怎么出结果？
这种情况一般不会出现，需要注意操作规范，做样品稀释时一定要混匀。如果排除操作，仍出现该现象，按低稀释倍数的平均菌落数报结果。本例中结果为35。
21、若10倍稀释度数值为0和1结果怎么报告，是5，10还是＜10？10倍稀释平板出现0和1的情况，结果报告是可以自己规定的吗？是报告5、10还是＜10？若结果合格判定为＜10，如何判定结果?
标准上没有明确要求，出现这种情况结果报告5和<10都可以。各实验室可以自己规定，但需要统一报告方式，并形成作业指导书。我们实验室作业指导书规定出现这种情况报告<10。
22、做的鸡肉产品，皮也是可食部分，检样时不包括吗？该制备有标准号吗？
根据《GB/T 4789.17-2003 食品卫生微生物学检验 肉与肉制品检验》及《GB 16869-2005 鲜、冻禽产品》要求，无论是生肉还是鲜冻家禽样品处理均是剪取肌肉，故如果做该类产品微生物检验处理不能取皮。