慢性应激性抑郁症动物模型造模方法

　　【造模机制】

　　采用长期不可预见性:中等强度的电击,刺夺食水、冷水浸袍,反转昼夜节律等应激刺激,造成孤养动物处于抑郁状态,复制抑郁症模型。

　　【造模方法】

　　1、动物及分组

　　选用 Wistar 成年雄性健康大鼠,体重 180～220g。利用旷场实验进行行为学评分,旷场实验水平运动和垂直运动总得分低于 30 分和高于 120 分的动物予以剔除,选择得分相近的大鼠 30 只,随机分为 3 组。1 组:正常对照组 10 只,不加任何处理，每疮 5 只喂养;1组:慢度轻度不可预见性应激抑郁模型组 10 只,单笼饲养,第8日起,按程序给予应激刺激,每日腹腔注射生理盐水 1.0ml:Ⅲ组:抑郁模型组十舒必利治疗组 10 只,单笼饲养,第 8 日起,按程序给予应激刺激,将舒必利溶于 1. 0ml 生理盐水,按 32.5mg/kg每日腹腔一次性注射。

　　2、抑郁大鼠模型的建立

　　按照 Katz 的方法略加改进,将明暗颠倒 24 小时,4℃冰水游泳、停水 24 小时、停食 24 小时、夹尾 1 分钟、30V 电压电击足底 5 秒、水平震荡 5 分钟(160Hz)、40℃环境 5 分钟,共九种刺激随机安排到 27 日内,每日一种,每种刺激出现 3 次,同种刺激不能连续出现,使动物不能预料刺激的发生。对照组不予任何刺激,上述各组处理均 27 天,其间进行行为学实验及糖水消耗试验,在第 28 天,即末次处理 24 小时后,断头处死,对治疗组、模型组和对照组进行各项指标的比较。

　　3、行为学测定

　　敞箱实验(open-field test):敞箱装置由不透明材料制成.底面为75cm×75cm 的正文形并被等分为 25 个等边方格,周围有高 40cm 的墙壁。7:30～12:00之间在安静的房间内进行此项实验观察。将大鼠置于中心方格内,观察大鼠在 5 分钟内穿越格数(四爪均进人的方格方可计数,为水平运动得分),后肢直立次数(两前爪腾空或攀附墙壁,为垂直运动得分),彻底清洁敞箱后再进行下 1 只大鼠的观察。每周进行 1 次行为学评分。

　　4、液体消耗

　　实验实验前,在隔噪声,安静的房间内,训练动物适应含糖饮水,每笼同是放置 2 个水瓶,第一个 24 小时,两瓶均装有 1%蔗糖水;随后的 24 小时,一个瓶装有1%蔗糖水,一个瓶装纯净水。24 小时的禁食、禁水后,进行动物的基础糖水/纯水消耗实验,同时给予每只大鼠事先定量好的两瓶水:一瓶 1%蔗糖水,一瓶纯水,24 小时后,取走两瓶并称重,计算动物的总液体消耗,糖水消耗,纯水消耗,糖水偏爱(糖水偏爱一糖水消耗/总液体消耗×100％)。每 9 天进行 1 次液体消耗实验。

　　5、体重及摄食量测定

　　每日 8 ：00 时加食物 50g,饮日 8：00 时称食物余量,同时称动物体重,计算 24 小时摄食量[摄食量=(食物总量-食物余量)/体重×100％]。模型组及治疗组大鼠在接受禁食、禁水刺激时除外。

　　有磁共振成像技术条件的还可进行下列实验观察：

　　1、碳共振成像及信息处理

　　实验在 Bruker B D SPEC 47/50 磁共振仪上完成。动物用 2%代巴比妥钠(40mg/kg)腹腔麻醉,头部在特定支架上固定后进行 T2 加权像扫捕,质于共振频率 200MHiz,重复时间(TR)加权像扫描,质子共振频率 200MHz,重复时间(TR)—225ms,回波时间(TE)=19.4ms,扫描片厚 1mm,相邻两片中心距离 1mim,共扫攝 16片,暴积(N)A)=3次,每次 6个园波。然后选择相同部位的磁共振进行大脑纵裂梁度、体积的测量。

　　2、磁共振

　　动物用2%皮巴比妥钠腹腔注射麻醉,首次剂量 40mg/kg,以后每小时经腹腔插管追加 8mg/kg 以维持连续麻醉。利用 Burker B D SPEC 47/30 磁共振仪分别测定前脑区域(4.5mm×4.5mm×4.5mm),下丘脑区域(3.5mm×3.5mm×3.5mm)的'H谱,质子共振频率 200MHz,重复时间(TR)=1500ms,回波时间(TE)=136ms,累积(NOA)=6144 次。测量 N-乙酰门冬氨酸(NAA)、含胆碱化合物(Cho),磷酸肌酸(PCt,化学位移3.5)峰高度,计算 NAA/Cho,NAA/PCr和 NAA/(Cho+PCr)的比值。