Cre小鼠的建立方法对Cre表达有什么影响？

早期Cre小鼠的建立主要通过随机转基因的方式，将外源特异性启动子连同Cre基因序列随机地整合到小鼠基因组中。这些随机转基因方法虽然可以筛选到细胞特异性表达的Cre小鼠品系，但是由于Cre整合的随机位点和基因拷贝数的不可控，Cre重组酶的表达很可能会受到染色体状态的影响，如DNA甲基化导致Cre的沉默。

因此，更为可靠的方法是通过基因打靶（ES细胞同源重组或CRISPR/Cas9途径）的方式将单拷贝的Cre基因定点整合到内源基因座中，受内源基因表达调控。

这样一般有以下3种做法：

（1）Cre表达框直接插入到内源基因起始密码子前；

（2）Cre连接在2A自剪切序列之后，插入到内源基因终止密码子位置；

（3）Cre连接在内部核糖体进入位点（IRES）之后，插入到内源基因终止密码子之后。

第一种做法（1）在表达Cre重组酶的同时会破坏内源基因的表达。有些基因的杂合子和纯合子表达基因量不同导致下游信号强度差异。第三种做法（3），IRES介导的翻译通常会导致Cre的表达强度衰减。此外，应尽可能避免破坏内源基因3'UTR，防止影响表达后修饰。因此，在建立新的Cre小鼠时，测试并记录新Cre小鼠中Cre的表达模式是非常有必要的。

Cre表达框直接插入到内源基因起始密码子前，在表达Cre重组酶的同时会破坏内源基因的表达。

将Cre基因定点敲入到内源基因的3'端，建立共表达Cre小鼠。