Rossetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞
Rossetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
|
MCC0090 |
Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞 |
100μl*10 |
保存条件：-80℃。
1.产品简介：
本产品是采用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。同时集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的优点，有助于含二硫键蛋白的高效表达，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。
基因型：Δ(ara-¬‐leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLysSRARE (CamR, KanR, StrR, TetR)
特点：1．Rosetta-¬‐gami系列菌株来源于Origami系列宿主菌，该系列菌株的优点除了含有Origami菌株原有的TrxB和Gor基因突变提高含二硫键正确折叠，有助于含二硫键蛋白的高效表达，同时含有Rosetta系列菌株中含有的真核细胞稀有密码子。2．含有pRARE质粒，能够提供AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，和GGA六个真核细胞中的稀有密码子tRNA，能够有效提升真核细胞蛋白的表达水平。3．含有pLySs质粒，能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平，的起始复制位点是p15 Origin，这使得该质粒能够和pUC-¬‐及pBR322-¬‐衍生的质粒互相共存。4． rpsL突变使得该菌株具有链霉素抗性DE3是溶源性的 λDE3，所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。被建议使用于含有Bla标记的氨苄抗性表达质粒，具有具有氯霉素，卡那，链霉素和四环素抗性，当使用pCDF系列载体时，还需要使用壮观霉素(Spectinomycin)进行筛选。pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg DNA。
2.使用说明：
1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。
3.注意事项：
1．刚化冻的细胞转化效率最高，避免反复化冻。
2．整个动作要轻柔。
3．质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。
*本试剂仅供实验室研究使用