哺乳动物细胞蛋白表达纯化实验服务周期
哺乳动物细胞表达系统的优势
1. 1. 能实现翻译后修饰及正确的蛋白折叠复性；
2. 2. 表达水平高；
3. 3. 高效启动子控制蛋白表达
4. 4. 适合大规模蛋白表达。
乳表达系统
提供表达载体构建、瞬时转染、表达测试及大规模动物细胞发酵和蛋白纯化等一站式蛋白技术服务。
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表达方式 |
细胞 |
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瞬时表达 |
HEK293，HEK293细胞来源于293细胞系，采用无血清悬浮培养；CHO-S细胞是来自中国仓鼠卵巢（CHO K1)细胞的克隆分离株，被训化为无血清悬浮培养。 |
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稳定表达 |
CHO-S，CHO-K1由CHO衍生而来，该细胞株培养条件简单、贴壁强度适中，比较容易转染 |
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稳定细胞株构建 |
DG44细胞（二氢叶酸还原酶缺陷型，DHFR-）由中国仓鼠卵巢（CHO）细胞衍生而来，常用于构建适合重组蛋白生产的细胞系。DG44细胞筛选和共扩增标记是DHFR基因。 |
表达载体：pcDNA 3.1，pIRES，pTT3，pCEP4，pATX1等常规载体以及我司分子技术人员自行合成与后期改造的专利性载体。
哺乳表达系统服务内容
1. 载体构建及改进
1) 可将cDNA克隆至客户或xxx提供的哺乳细胞的表达载体中；
2) 可在表达载体中添加分泌信号肽和纯化标签，促进蛋白分泌表达及满足一步亲和纯化的需求；
3) 能生产并鉴定高效稳定细胞系，适合大规模发酵生产。
2. 稳定基因表达符合长期生存需求。整个实验操作流程提供长期稳定及规模可调的蛋白生产
3. 瞬时表达（TGE）
1) 与稳定基因表达相比，TGE主要适用于短期内制备重组蛋白，一般在10天内即可快速转染，无需质粒DNA的遗传性选择
2) 瞬时表达使用悬浮细胞，能够完成体积到100L的蛋白表达。
4. 工艺过程开发及扩大规模。能够优化表达过程以及表达产物，检测细胞表达量，摸索发酵罐发酵条件，适合大规模发酵生产。
5. 纯化。拥有完整的蛋白纯化系统，亲和纯化，凝胶过滤，离子交换及疏水层析等纯化方法，能够完成带标签与不带标签蛋白的纯化，以及纯化工艺的摸索。
服务流程
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服务项目(Service Items) |
周期（周）Time(weeks) |
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蛋白分析与密码子优化 |
项目开始前完成 |
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基因合成 |
2~4 |
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载体构建 |
1 |
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基因表达纯化测试 |
2 |
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1L发酵表达及纯化 |
2 |
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切标签 |
2 |
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大规模的发酵与纯化 |
以项目需要为准 |
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总计 |
8~10 |