一种高效提取木醋液中酚类提取物的方法与流程
本发明涉及一种高效提取木醋液中酚类提取物的方法。
背景技术：
木醋液是一种富含酸类、酚类、酮类等物质的黄棕色液体。近年来，木醋液在生物医药和化妆品领域拥有比较广泛的应用。科学家们发现木醋液具有较强的杀菌性和抗氧化性能。同时，Ho等在2013年发现了木醋液无论是在体内还是在体外都具有较强的消炎性，证实了木醋液可以用于NLRP3和代谢综合征的治疗。以上发现奠定了木醋液在生物医药领域广泛应用的坚实理论基础。Loo等在2007年证实了酚类提取物是木醋液中主要的抗氧化物质。同时，Shinsuke在2012年证实了，酚类提取物是木醋液中主要的杀菌物质，其中高含量的乙酸可以增强酚类提取物的杀菌性能。由于酚类提取物较强的抗氧化特性和杀菌特性，木醋液中酚类提取物在肠道疾病和皮肤疾病方面的应用越来越受到科学家们的关注。
但是，木醋液中成分复杂，部分焦油类物质具有致癌风险。所以我们在进行生物医药应用之前，木醋液必须经过特定的分离纯化过程，以去除木醋液中对人体有危害风险的成分。目前，科学家们较常用的木醋液精制方法为静置法、蒸馏法、低温冷冻解冻法、有机溶剂萃取法等。一般用作药品、食品等领域的木醋液是用溶剂萃取法来精制的。其中，乙酸乙酯、氢氧化钠、碳酸氢钠三者相组合的溶剂法是目前较常用的提取木醋液中酚类提取物的方法。但是，此种方法会在酚类提取物中引入大量乙酸、糠醛等杂质，不能直接应用于医药领域。虽然Shinsuke利用乙酸乙酯、碳酸氢钠、柱子纯化组合的方法得到了较为纯净的酚类提取物，但是此方法价格高昂，而且不可避免的带入了大量的糠醛。所以，为了提高木醋液在医药领域的广泛应用，提出一种价格低廉且能够分离出一种纯净酚类提取物的方法是迫切需要的。
技术实现要素：
为了克服以上的技术难题和缺陷，本发明旨在提出一种高效提取木醋液中酚类提取物的方法。使用该方法提取的酚类提取物更为纯净，价格更为低廉，相对比例更加合理。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
一种高效提取木醋液中酚类提取物的方法，包括如下步骤：
(1)采用乙酸乙酯萃取木醋液三次，合并三次所得的萃取液，得到一级木醋液；
(2)采用0.6mol/L的NaHCO3溶液萃取所述一级木醋液三次，合并三次所得的萃取液，得到二级木醋液；
(3)采用1mol/L的氢氧化钠溶液萃取所述二级木醋液两次，合并所得的萃取液，得到酚类粗提物，向所述酚类粗提物中加入浓磷酸，调节PH至3、6或9中的一种，得到三级木醋液；
(4)再向所述三级木醋液中加入质量浓度为5％、10％、15％或20％的Na2HPO4溶液，摇荡均匀后，采用混合液进行萃取，得到四级木醋液；
所述混合液为正己烷、乙酸乙酯的混合液；
(5)将所述四级木醋液进行35℃旋转蒸发，烘干，得到本发明所述的酚类提取物。
优选的，所述木醋液为柞木木醋液，酸枣核木醋液，玉米芯木醋液，核桃壳木醋液，稻壳木醋液和花生壳木醋液中的一种。
优选的，步骤(1)中所述乙酸乙酯萃取木醋液三次，萃取工艺为：将同样体积的乙酸乙酯分三次加入木醋液中，在室温下振荡5分钟，静置分层。
优选的，步骤(2)中所述NaHCO3萃取二级木醋液三次，萃取工艺为：将同样体积的0.6mol/L的NaHCO3溶液分三次加入一级木醋液中，在室温下振荡5分钟，静置分层。
优选的，步骤(3)中所述氢氧化钠溶液萃取所述二级木醋液两次萃取工艺为：将同样体积的氢氧化钠溶液分两次加入所述二级木醋液中，在室温下振荡5分钟，静置分层。
优选的，步骤(4)中所述向三级木醋液中加入浓磷酸，调节PH至6。
优选的，步骤(4)中所述Na2HPO4溶液的质量浓度为10％或15％。
优选的，步骤(4)中所述Na2HPO4溶液和三级木醋液的体积比为1:1。
优选的，步骤(4)中所述混合液和三级木醋液的体积比为1:1。
优选的，步骤(4)中所述正己烷和乙酸乙酯的体积比为7:3，1:1，3:7或1:1。
有益效果：本发明通过调整萃取剂比例以及盐的浓度等，不但提供了一种高效提取木醋液中酚类提取物的方法，提取出的酚类提取物更为纯净，而且也提供了一种从木醋液中高效提取可以更好的应用于药物领域的酚类提取物的方法，其中苯酚的含量大幅减少，药用的有效成分如愈创木酚和2,6-二甲氧基苯酚保持着较高的提取率。总之，本发明提出了一种高效提取木醋液中酚类提取物的方法，同时也优化了酚类提取物的比例，且结果证明本发明是切实可行。
附图说明
后文将参照附图以示例性而非限制性的方式详细描述本发明的一些具体实施例。附图中相同的附图标记标示了相同或类似的部件或部分。本领域技术人员应该理解，这些附图未必是按比例绘制的。附图中：
图1为本发明实施例1的提取木醋液中酚类提取物的方法流程图；
图2为向三级木醋液中加入浓磷酸后，不同PH值下的酚类提取物的TIC峰面积柱状图；
图3为加入不同浓度的Na2HPO4后酚类提取物的TIC峰面积折线图；
图4为加入不同比例正己烷和乙酸乙酯后酚类提取物的TIC峰面积柱状图；
图5为加入不同浓度的Na2HPO4和不同比例的正己烷和乙酸乙酯的条件下，酚类提取物的TIC峰面积柱状图；
图6为氢氧化钠二级萃取和三级萃取时酚类提取物的TIC峰面积柱状图；
图7为酚类提取物、酚类粗提物、木醋液的成分对比图，其中a为酚类提取物的TIC图；b为酚类粗提物的TIC图；c为木醋液的TIC图；
图8为从酸枣核木醋液和柞木木醋液中提取的药用酚类提取物的成分对比图，其中a为酸枣核木醋液的TIC图，b为柞木木醋液的TIC图。
具体实施方式
本发明涉及一种高效提取木醋液中酚类提取物的方法，包括如下步骤：
(1)采用乙酸乙酯萃取木醋液三次，合并三次所得的萃取液，得到一级木醋液；
(2)采用0.6mol/L的NaHCO3溶液萃取所述一级木醋液三次，合并三次所得的萃取液，得到二级木醋液；
(3)采用1mol/L的氢氧化钠溶液萃取所述二级木醋液两次或三次，合并所得的萃取液，得到酚类粗提物，向所述酚类粗提物中加入浓磷酸，调节PH至3、6或9中的一种，得到三级木醋液；
(4)再加入质量浓度为5％、10％、15％或20％的Na2HPO4溶液，摇荡均匀后，采用混合液进行萃取，得到四级木醋液；
所述混合液为正己烷、乙酸乙酯的混合液；
(5)将所述四级木醋液进行35℃旋转蒸发去除溶剂，烘干，得到本发明所述的酚类提取物。
本发明所述的酚类提取物杂质较少，但是苯酚含量较高。
作为本发明的一个实施例，向三级木醋液中加入浓磷酸，调节PH至6。图2为向三级木醋液中加入浓磷酸后，不同PH值下的酚类提取物的TIC峰面积柱状图。如图2所示，所述浓磷酸调节三级木醋液的PH优选酸碱度为6。当PH＝3时，酚类提取物中含有大量的乙酸；当PH＝9时，酚类提取物中，所有酚类提取物含量均大幅度减少。
作为本发明的一个实施例，加入的Na2HPO4溶液的质量浓度为5％、10％、15％、20％，优选加入10％或者15％Na2HPO4溶液，更优选的加入10％的Na2HPO4溶液。图3为加入不同浓度的Na2HPO4后酚类提取物的TIC峰面积折线图。从图3可知，当加入10％或者15％质量浓度的Na2HPO4时，酚类提取物的萃取效果较好，综合所有酚类提取物的萃取情况，10％质量浓度的Na2HPO4最优。本发明所使用的Na2HPO4的作用是改变了溶液的PH值及部分盐析作用，降低了有害物质的萃取率，提高了酚类提取物的萃取率。需要理解的是，本发明所用盐类优选为Na2HPO4溶液，但也可为NaHCO3溶液等其它盐类。
作为本发明的一个实施例，所述正己烷和乙酸乙酯的体积比为7:3，1:1，3:7或1:1。图4为加入不同比例正己烷和乙酸乙酯后酚类提取物的TIC峰面积柱状图。从图4可知，当用体积比为1:1的正己烷、乙酸乙酯作为萃取剂时，酚类提取物的萃取效果较好，明显高于其他比例的萃取效果。
图5为加入不同浓度的Na2HPO4和不同比例的正己烷和乙酸乙酯的条件下，酚类提取物的TIC峰面积柱状图。从图5可知，虽然在10％的磷酸氢二钠溶液和1:1的正己烷，乙酸乙酯混合液的共同作用下，所有酚类提取物的萃取率都很高，但是其中苯酚的含量较高，此比例仅作为高效提取木醋液中纯净的酚类提取物的方法。而15％的磷酸氢二钠和1:1的正己烷，乙酸乙酯搭配，虽然各种酚类提取物的提取率有所下降，但是苯酚的含量大幅下降，此比例可以作为提取木醋液中药用酚类提取物方法。
作为本发明的一个实施例，采用所述1mol/L的氢氧化钠溶液萃取所述二级木醋液两次。图6为氢氧化钠二级萃取和三级萃取时酚类提取物的TIC峰面积柱状图。如图6所示，加入过多的氢氧化钠并没有提高酚类提取物的萃取率，因此，用1mol/L的氢氧化钠两级萃取，酚类提取物的萃取效果较优。
图7为酚类提取物、酚类粗提物、木醋液成分对比图，其中a:酚类提取物的TIC图；b:酚类粗提物的TIC图；c：木醋液的TIC图。如图7所示，本发明达到了预期的结果，在所有最优条件下，提取出的酚类提取物和木醋液原液、酚类粗提物相比，去除了所有的杂质，得到的酚类提取物十分纯净，可以直接稀释后应用于农药，化妆品，食品添加剂等领域，其中农药中可以作为杀虫剂，化妆品中可以治疗皮炎，医药领域可以治疗皮炎、腹泻、脚气等，食品方面可以作为抗氧化剂等。
作为本发明的一个实施例，所述木醋液为柞木木醋液，酸枣核木醋液，玉米芯木醋液，核桃壳木醋液，稻壳木醋液和花生壳木醋液中的一种；优选柞木木醋液。所述木醋液可直接购买得到，也可经柞木、酸枣核、玉米芯、核桃壳、稻壳或花生壳等原料制备得到。制备得到的具体工艺可为：原料经干馏、冷凝得到木醋液，其中，干馏、冷凝工艺采取常规现有工艺即可，例如具体干馏、冷凝工艺可为：A干馏：将原料投入炭窑中，进行加热干馏；B冷凝：将干馏产生的气体烟气分离后，冷凝黄褐色气体部分，收集冷凝装置中90-170℃之间的组分，得到粗制木醋液。图8为从酸枣核木醋液和柞木木醋液中提取的药用酚类提取物的成分对比图，其中a为酸枣核木醋液，b为柞木木醋液。图8为在5％的磷酸氢二钠和1:1的正己烷、乙酸乙酯的条件下，萃取的酸枣核木醋液和柞木木醋液中的酚类提取物，从图中可以看出，愈创木酚和2,6-二甲氧基苯酚的萃取率最高，而苯酚的含量大幅减少，由此可以证明，本发明提供了一种从木醋液中高效提取药用酚类提取物的方法。
实施例1
图1为本发明实施例1的提取木醋液中酚类提取物的方法流程图。如图1所示，每次使用100mL乙酸乙酯分三次加入300mL木醋液(即粗制木醋液)，弃去水相，留下有机相；然后使用100mL的0.6mol/L的碳酸氢钠溶液三级萃取，弃去水相，留下有机相，其中碳酸氢钠所萃取得到的溶液为水相，酚类提取物在乙酸乙酯相中；取100mL有机相溶液，加入1mol/L100mL氢氧化钠三级萃取，合并萃取液，加入3mL浓磷酸调节溶液PH至6.0，得到酚类提取物粗提物；然后，加入100mL10％的Na2HPO4溶液，摇荡均匀后，加入100mL1:1(V/V)正己烷：乙酸乙酯的混合液三级萃取，合并萃取液；然后在旋转蒸发仪上，35℃旋转蒸发去除溶剂，最后，烘干即为优化酚类提取物的相对比例后的酚类提取物。
本发明通过调整萃取剂比例以及盐的浓度等，不但提供了一种高效提取木醋液中酚类提取物的方法，提取出的酚类提取物更为纯净，而且也提供了一种从木醋液中高效提取可以更好的应用于药物领域的酚类提取物的方法，其中苯酚的含量大幅减少，药用的有效成分如2-甲氧基苯酚和2,6-二甲氧基苯酚保持着较高的提取率。总之，本发明提出了一种高效提取木醋液中酚类提取物的方法，同时也优化了酚类提取物的比例，且结果证明本发明是切实可行。
本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。因此，无论从哪一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在本发明的权利要求书的范围内。