稳定株构建实验需要考虑的因素有哪些?

稳定整合试验中需要考虑的几个关键因素有:

1),外源插入片段的拷贝数。多数情况下,低拷贝甚至是单拷贝可以减少人为实验因素的干扰。

2),整合的几率,这不仅决定了稳定株筛选的难易程度,而且还可以帮助人们更容易得到混合稳定株。

3),整合位点的转录活跃度,决定了稳定株中外源片段的表达质量。最理想的状况是单拷贝,但转录活性比较高。

4),整合后的稳定性。不同的整合位点决定了外源片段在染色体中的稳定性,有些区域易发生重组或者丢失,从而导致稳定株再次丢失的情况。

5),最好使用混合稳定株或者获得多个不同单克隆稳定株。因为稳定整合往往伴随这插入失活宿主内源基因,所以实验时通过使用混合稳定株,或者对多个单克隆稳定株进行比较,可以帮助研究人员获得更精确的实验数据。

(0)

相关推荐

  • 24号-微软提出CLIPBERT:通过稀疏采样的视频语言学习

    重磅干货,第一时间送达 小白导读 论文是学术研究的精华和未来发展的明灯.小白决心每天为大家带来经典或者最新论文的解读和分享,旨在帮助各位读者快速了解论文内容.个人能力有限,理解难免出现偏差,建议对文章 ...

  • 稳定株构建方法及注意事项

    构建稳定株的方法 其实用脂质体转染.磷酸钙转染法等理论上是可以构建稳定株的,但这些方法整合入基因组的效率极低,很难成功.而慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组,效率很高,是建立稳定株的最优方式. 构 ...

  • 稳定细胞株(系)构建实验要求

    稳定细胞系(stable cell line),是指质粒整合到染色体上后,用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系,就成了稳定表达的cell line. 以下实验,构建稳定细胞株而不是瞬时转染更能 ...

  • 在运城买房需要考虑哪些因素?这十点必须知道!

    中秋佳节刚刚结束,马上又将迎来国庆黄金周,近期购房咨询的网友明显增多,很多网友(尤其是在外地工作的)都在急切的想了解运城最新的楼市资讯,还有就是询问在运城买房时都需要考虑哪些因素.毕竟购房置业是家庭中 ...

  • 稳定转染细胞株实验流程

    稳定转染细胞株,即稳转细胞株,该技术已广泛应用于包括基因功能研究.蛋白质工程.重组抗体制备等生命科学的各个领域.稳转细胞株的构建通常是将外源基因克隆至含有某种筛选标记的载体上,将载体转染目的细胞并整合 ...

  • 购买防潮密封胶需要考虑哪些因素?使用注意事项有哪些?

    很多电器需要使用到防潮密封胶的保护,密封胶固化后具有防水.防潮的性能,而防潮密封胶防潮性能突出,其他性能不变,用在电器中依然可以展现隔音.隔热等要求.但购买防潮密封胶的时候需要考虑多种因素. 购买防潮 ...

  • 刚需买房需要考虑哪些因素

    根据购房者的需求不同,现在购房主要分为两类人,一类是刚需购房者,另一类是投资购房者,那么刚需购房者需要考虑哪些因素呢? 1.经济负担能力.如果每月支付的金额太高,会对买家的生活质量产生一定的影响. 2 ...

  • 从事自由职业需要考虑哪些因素

    每个人的兴趣爱好不同,因此在选择工作之时自然也不相同,大家都希望自己可以选择一份满足个人需求的工作,收入较高,工作较少,时间自由,等等正是因为有了这样的需求,于是自由职业便成为了大家心目中的理想职业, ...

  • 稳定细胞株构建---高产细胞株的秘密

    CHO和骨髓瘤细胞是构建稳定细胞株最常用的两种宿主细胞.基本上用这两类细胞生产的治疗性蛋白都能分泌到细胞外,从而可以从细胞培养液中收获产物.CHO细胞属于成纤维细胞,是一种非分泌型细胞,它本身很少分泌 ...

  • 稳定株是单克隆的判别筛选方法

    实验室里大家都埋头做实验,可为什么老板每次都骂我们,你都快30的人了这也不会那也不会,白长这么大了,栽培了你那么多年到头来啥也指望不上.对此,我深感委屈,那个细胞我养了那么久,它还是那样衣来伸手饭来张 ...