荧火素酶检测植物蛋白质-蛋白质的相互作用

蛋白质作为生命体的基本组分, 是细胞功能的最终执行者。生物体内检测蛋白互作的方法有酵母双杂交 (Yeast Two-hybrid, Y2H)、免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, CoIP)、双分子荧光互补(Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)及荧光共振能量转移技术(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET) 等 。荧火素酶互补实验 (Luciferase Complementation Assay, LCA) 则因其高灵敏度、可定量化、操作简单高效被广泛应用于植物学和动物学蛋白质互作研究。

荧火素酶互补实验最初应用于哺乳动物细胞内蛋白质互作研究 , 后来用于检测植物蛋白质-蛋白质的相互作用 。其实验原理是以荧火素 (luciferin) 为底物来检测荧火素酶 (luciferase) 的活性。具体而言, 生物体来源的荧火素酶催化底物荧火素发生氧化, 发出最强波长在560 nm左右的生物荧光 (bioluminescence)。目前, 应用最为广泛的荧火素酶基因来源于北美萤火虫 (firefly luciferase), 该基因编码550个氨基酸组成的荧火素酶蛋白 (大小为62 kDa)。实验中, 荧火素酶蛋白被切成N端和C端2个功能片段, 即NLuc (2–416AA)和 CLuc (398–550AA) (Luker et al., 2004; Chenet al., 2008)。在一个实验体系中, 待检测的2个目标蛋白分别与NLuc和CLuc融合, 如果2个目标蛋白相互作用, 则荧火素酶的NLuc和CLuc在空间上会足够靠近并正确组装, 从而发挥荧火素酶活性, 即分解底物产生荧光

我们在化学发光及体外诊断研究方面拥有自己的专业技术团队，现有产品主要包括有化学发光试剂、化学发光底物、发光标记物、发光增强剂、染料探针类、微生物和酶的显色底物以及体外诊断试剂，纯化纯度高达98%+以上并可以提供液相图谱来佐证纯度，并且提供相关技术指导服务。

我们可以提供的活体成像试剂还有：

吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH

吖啶酯NSP-DMOAE-NHS

吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHS

Cy3-NHS酯

Cy7-NHS酯

5-羧基荧光素-NHS酯

6-羧基荧光素-NHS酯

5(6)-羧基荧光素-NHS酯

6-羧基荧光素

D荧光素钠盐 D-Luciferin, Sodium Salt

D-荧光素钾盐  D-Luciferin, Potassium Salt

D-荧光素萤火虫，游离酸  D-Luciferin Firefly, free acid

萤火虫荧光素酶firefly luciferase

海肾荧光素酶Renilla luciferase

天然腔肠荧光素

Coelenterazine h 腔肠素h

Coelenterazine f 腔肠素f

Coelenterazine h/ 腔肠素h

腔肠荧光素

吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH

吖啶酯-T4结合物

吖啶酯-T3结合物

吖啶磺酰胺盐-N-乙胺基马来酰亚胺

吖啶磺酰胺盐-T4结合物

吖啶磺酰胺盐-T3结合物

生物素-T4结合物

化学发光分析试剂及标记物

生物素-T3结合物

生物素-NHS活性酯

吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH

吖啶酯NSP-DMOAE-NHS

吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHS

Cy3-NHS酯

Cy7-NHS酯

5-羧基荧光素-NHS酯

6-羧基荧光素-NHS酯

5(6)-羧基荧光素-NHS酯

6-羧基荧光素

zzj 2021.3.8