如何区分tm1a和tm1c，tm1d？

“Knockout First” allele（tm1a）是在目的基因内含子中插入一个SA-IRES-reporter片段（含有报告基因lacZ和一个启动子驱动的Neo），lacZ的转录在SA的作用下受目的基因启动子控制，并在polyA处终止，从而达到终止目的基因转录、破坏基因表达的目的。Flp的表达可以删除SA-IRES-reporter片段，将tm1a转变成conditional allele（tm1c），删除SA-IRES-reporter片段，从而恢复基因功能。在tm1a的基础上，Cre的表达可以删除Neo和Critical Region从而变成lacZ标记的Allele（tm1b）同时敲除基因；在tm1c的基础上，Cre的表达可以删除tm1c allele上的Critical Region而变成移码突变的tm1d，从而使该基因不表达。而tm1e是由于基因打靶时发生错误而成，本应在3’同源臂进行重组，却错误的在Critical Region的位置进行了重组，从而丢掉了3’远端的loxp。

tm1a ：终止目的基因转录、破坏基因表达。

tm1c：恢复基因功能。

tm1d：在tm1c的基础上，Cre的表达可以删除tm1c allele上的Critical Region而变成移码突变的tm1d，从而使该基因不表达。