重度免疫缺陷小鼠(C-NKG小鼠)模型构建

品系名称:NOD/Shi-Prkdcscid Il2rgem1/Cyagen

简称:C-NKG小鼠

背景:NOD/Shi-Scid

品系构建策略:

C-NKG 小鼠是通过CRISPR/Cas9 技术在NOD/Shi-scid背景品系上敲除Il2rg基因自主研发的一款重度免疫缺陷小鼠。

品系说明:

  • 缺乏成熟的T、B和NK细胞。

  • 补体活性降低。

  • 巨噬细胞对人源细胞吞噬作用弱。

  • 树突状细胞功能下降。

  • 无T、B细胞泄漏。

研究应用:

  • CDX和PDX。

  • 细胞免疫疗法的有效性和安全性评估。

  • 免疫系统人源化小鼠模型的制备(移植人PBMC或HSC进行人免疫系统重建)。

  • GvHD模型。

  • 肿瘤免疫相关研究。

表型验证:

1. Prkdc基因突变

图1. Prkdcscid突变是由Prkdc基因84号外显子中的TAT→TAA产生的,基因测序结果表明,C-NKG小鼠携带有Prkdcscid突变。

2. Il2rg基因敲除

图2. 对C-NKG 小鼠Il2rg基因进行PCR检测,结果表明C-NKG 小鼠Il2rg基因成功敲除。

野生型条带大小:1430bp;敲除部分片段条带大小:388bp。

3. C-NKG小鼠外周血中B、T、NK细胞的检测

图3. C-NKG小鼠外周血中的B、T、NK细胞严重缺失,为重度免疫缺陷鼠。

取BALB/c、 C-NKG小鼠的外周血,对其T 、B和NK细胞的组成进行代表性流式细胞免疫表型分析及统计对比。结果表明 ,与BALB/c小鼠相比,C-NKG小鼠外周血中的B细胞(CD3-CD19+)、T细胞(CD3+CD19-)、辅助性T细胞(CD3+CD4+CD8-)、细胞毒性T细胞(CD3+CD4-CD8+)、NK细胞(CD335+CD3-)几乎完全缺失。

4. C-NKG小鼠淋巴组织中B、T、NK细胞的检测

图4.  C-NKG小鼠淋巴组织中的B、T、NK细胞严重缺失,为重度免疫缺陷鼠。

取BALB/c、 C-NKG小鼠的淋巴组织,对其T 、B和NK细胞的组成进行代表性流式细胞免疫表型分析及统计对比。结果表明 ,与BALB/c小鼠相比,C-NKG小鼠淋巴组织中的B细胞(CD3-CD19+)、T细胞(CD3+CD19-)、辅助性T细胞(CD3+CD4+CD8-)、细胞毒性T细胞(CD3+CD4-CD8+)、NK细胞(CD335+CD3-)几乎完全缺失。

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