重度免疫缺陷小鼠(C-NKG小鼠)模型构建
品系名称:NOD/Shi-Prkdcscid Il2rgem1/Cyagen
简称:C-NKG小鼠
背景:NOD/Shi-Scid
品系构建策略:
C-NKG 小鼠是通过CRISPR/Cas9 技术在NOD/Shi-scid背景品系上敲除Il2rg基因自主研发的一款重度免疫缺陷小鼠。
品系说明:
缺乏成熟的T、B和NK细胞。
补体活性降低。
巨噬细胞对人源细胞吞噬作用弱。
树突状细胞功能下降。
无T、B细胞泄漏。
研究应用:
CDX和PDX。
细胞免疫疗法的有效性和安全性评估。
免疫系统人源化小鼠模型的制备(移植人PBMC或HSC进行人免疫系统重建)。
GvHD模型。
肿瘤免疫相关研究。
表型验证:
1. Prkdc基因突变
图1. Prkdcscid突变是由Prkdc基因84号外显子中的TAT→TAA产生的,基因测序结果表明,C-NKG小鼠携带有Prkdcscid突变。
2. Il2rg基因敲除
图2. 对C-NKG 小鼠Il2rg基因进行PCR检测,结果表明C-NKG 小鼠Il2rg基因成功敲除。
野生型条带大小:1430bp;敲除部分片段条带大小:388bp。
3. C-NKG小鼠外周血中B、T、NK细胞的检测
图3. C-NKG小鼠外周血中的B、T、NK细胞严重缺失,为重度免疫缺陷鼠。
取BALB/c、 C-NKG小鼠的外周血,对其T 、B和NK细胞的组成进行代表性流式细胞免疫表型分析及统计对比。结果表明 ,与BALB/c小鼠相比,C-NKG小鼠外周血中的B细胞(CD3-CD19+)、T细胞(CD3+CD19-)、辅助性T细胞(CD3+CD4+CD8-)、细胞毒性T细胞(CD3+CD4-CD8+)、NK细胞(CD335+CD3-)几乎完全缺失。
4. C-NKG小鼠淋巴组织中B、T、NK细胞的检测
图4. C-NKG小鼠淋巴组织中的B、T、NK细胞严重缺失,为重度免疫缺陷鼠。
取BALB/c、 C-NKG小鼠的淋巴组织,对其T 、B和NK细胞的组成进行代表性流式细胞免疫表型分析及统计对比。结果表明 ,与BALB/c小鼠相比,C-NKG小鼠淋巴组织中的B细胞(CD3-CD19+)、T细胞(CD3+CD19-)、辅助性T细胞(CD3+CD4+CD8-)、细胞毒性T细胞(CD3+CD4-CD8+)、NK细胞(CD335+CD3-)几乎完全缺失。