细胞增殖实验技术原理
细胞增殖(proliferation)是生活细胞的重要生理功能之一,是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。
细胞增殖技术原理
正常细胞代谢旺盛,其线粒体内的琥珀酸脱氢酶,可将四唑盐类物质(如 MTT、XTT、WST-1和WST-8等 )还原为紫色结晶状物质,沉积在细胞周围,然后通过酶标仪读取OD值,从而检测到细胞增值状态。
Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒,可用于简便而准确的细胞增殖分析。
其基本原理为:该试剂盒中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快,则颜色越深。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞 数目呈线性关系。
细胞增殖结果示例
参考文献
A. Deng, Danni et al. “p62 acts as an oncogene and is targeted by miR-124-3p in glioma.” Cancer cell international vol. 19 280. 6 Nov. 2019, doi:10.1186/s12935-019-1004-x
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