基因敲除技术实验流程

根据目的基因序列设计合成sgRNA，将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞，通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割，引起DNA双链断裂(DSB)，通过细胞自身的非同源末端修复(NHEJ)途径造成目的基因片段缺失或移码突变，进而实现目的基因敲除。

　　基因敲除技术优势

　　经过优化的CRISPR/Cas9系统，适用于更广泛的哺乳动物细胞，提高了编辑率高，同时大大降低了脱靶效应。

　　多种方案可供选择，满足不同研究需要。

　　基因敲除实验流程

　　基因敲除效率实验周期优点缺点

　　PiggyBac转座酶整合方案高短操作方便不适用于转染效率低的细胞

　　慢病毒感染方案高较长能感染大部分难转染细胞需要包装慢病毒

　　瞬时转染方案低较长不整合外源基因到细胞基因组中耗时较长，阳性率相对较低