Northern杂交检测样本收集注意事项

1.    新鲜组织：

用解剖刀等迅速切成小碎块，约30-100 mg，放入2.0 mL离心管中，开盖液氮速冻15 min，-80℃保存，干冰运输。

每个northern blot泳道提供2-3管样品。

注：解剖刀处理组织的时间尽量控制在1 min以内。

液氮速冻时必须开盖，以防炸裂。

2.    细胞样品：

悬浮细胞1000-1500 rpm，5 min，常温离心收集细胞。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，吹打收集，PBS洗涤细胞，去除多余培养基和胰蛋白酶。开盖液氮速冻15 min，-80℃保存，干冰运输。

一般情况下，细胞培养的6孔板，每孔细胞数量约为0.5~2×106个。每个离心管中的细胞数量控制在5×106个左右！每个northern blot泳道提供2-3管样品。

3.    RNA样品：

RNA溶液（DEPC-treated water溶解）：-80℃保存，干冰运输。

RNA沉淀：保存在75%乙醇（无核酶）中的RNA沉淀，2~8℃保存一周，-20℃保存一年；加冰块低温运输。

质量检测:

取1-2 μL的RNA进行琼脂糖凝胶电泳，5s，18s，28s清晰可见，28s的亮度应为18s的1.5~2倍；无基因组污染。

纯度、浓度检测:

OD260/280=1.9~2.2；浓度≥300 ng/μL。