Masson三色染色法(固定液处理)

Masson三色染色法

选择固定液很重要

Ⅰ 固定液:甲醛升汞液

⑴流水冲洗,入70%酒精,加碘液脱汞至酒精呈极浅的棕色,5%硫代硫酸钠(sodium hyposulfite)水溶液去碘,水洗

⑵70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水

⑶二甲苯透明

⑷浸蜡两次

⑸石蜡包埋

⑹切片8微米以下,贴片,烘干

⑺切片经二甲苯脱蜡,经各级酒精下行至蒸馏水

⑻1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟,蒸馏水洗去多余染料

地衣红液:80%酒精100毫升,地衣红(orcein)1克,盐酸(hydrochloric acid )1毫升

⑼Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟,充分水洗

⑽必要时用盐酸酒精分色,自来水洗至切片呈蓝色

⑾丽春红品红液染色5~10分钟,用滤纸沾干

丽春红品红液:蒸馏水100毫升,依次溶解:丽春红(Ponceau S)0.8克,酸性品红(acid fuchsin)0.4克,冰醋酸(glacial acetic acid)1毫升

⑿0.5%醋酸(acetic acid)水溶液洗30~60秒,蒸馏水略洗

⒀1%磷钼酸(phosphomolybdic acid hydrate)水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色

⒁1%醋酸水溶液洗30秒

⒂2%亮绿液染色3~5分钟

亮绿液:蒸馏水98毫升,亮绿Y(Light green Y) 2克,冰醋酸2毫升

⒃1%醋酸水溶液洗涤

⒄95%酒精和无水酒精脱水各1分钟

⒅二甲苯透明,中性树胶封片

结果:胶原纤维绿色;弹性纤维棕色或深棕色;肌纤维红色;纤维素红色;红细胞红色;细胞核蓝黑色

Ⅱ 固定液:Zenker液

⑴流水冲洗,入70%酒精,加碘液脱汞至酒精呈极浅的棕色,5%硫代硫酸钠水溶液去碘,水洗

⑵70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水

⑶二甲苯透明

⑷浸蜡两次

⑸石蜡包埋

⑹切片8微米以下,贴片,烘干

⑺切片经二甲苯脱蜡,经各级酒精下行至蒸馏水

⑻1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟,蒸馏水洗去多余染料

地衣红液:80%酒精100毫升,地衣红1克,盐酸1毫升

⑼Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟,充分水洗

⑽必要时用盐酸酒精分色,自来水洗至切片呈蓝色

⑾丽春红品红液染色5~10分钟,用滤纸沾干

丽春红品红液:蒸馏水100毫升,依次溶解:丽春红0.8克,酸性品红0.4克,冰醋酸1毫升

⑿0.5%醋酸水溶液洗30~60秒,蒸馏水略洗

⒀1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色

⒁1%醋酸水溶液洗30秒

⒂2%亮绿液染色3~5分钟

亮绿液:蒸馏水98毫升,亮绿Y2克,冰醋酸2毫升

⒃1%醋酸水溶液洗涤

⒄95%酒精和无水酒精脱水各1分钟

⒅二甲苯透明,中性树胶封片

结果:胶原纤维绿色;弹性纤维棕色或深棕色;肌纤维红色;纤维素红色;红细胞红色;细胞核蓝黑色

Ⅲ 固定液:Bouin液

⑴入70~80%酒精浸泡至基本无黄色(可加少量碳酸锂帮助脱去黄色)

⑵90%酒精 、95%酒精、无水酒精脱水

⑶二甲苯透明

⑷浸蜡,包埋,切片小于8微米,粘片,烘干

⑸切片经二甲苯脱蜡,经各级酒精下行至蒸馏水

⑹1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟,蒸馏水洗去多余染料

地衣红液:80%酒精100毫升,地衣红1克,盐酸1毫升

⑺Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟,充分水洗

⑻必要时用盐酸酒精分色,自来水洗至切片呈蓝色

⑼丽春红品红液染色5~10分钟,用滤纸沾干

丽春红品红液:蒸馏水100毫升,依次溶解:丽春红0.8克,酸性品红0.4克,冰醋酸1毫升

⑽0.5%醋酸水溶液洗30~60秒,蒸馏水略洗

⑾1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色

⑿1%醋酸水溶液洗30秒

⒀2%亮绿液染色3~5分钟

亮绿液:蒸馏水98毫升,亮绿Y2克,冰醋酸2毫升

⒁1%醋酸水溶液洗涤

⒂95%酒精和无水酒精脱水各1分钟

⒃二甲苯透明,中性树胶封片

结果:胶原纤维绿色;弹性纤维棕色或深棕色;肌纤维红色;纤维素红色;红细胞红色;细胞核蓝黑色

Ⅳ 固定液:甲醛(水或生理盐水或磷酸盐缓冲液)、多聚甲醛

染色前必须用升汞(mercuric chloride)液或苦味酸(picric acid)酒精液媒染。

⑴组织块常规脱水,石蜡包埋,切片不超过8微米

⑵切片经二甲苯脱蜡,经各级酒精下行至蒸馏水

⑶在3%升汞液或苦味酸酒精溶液媒染1小时

⑷1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟,蒸馏水洗去多余染料

地衣红液:80%酒精100毫升,地衣红1克,盐酸1毫升

⑸Weigert苏木精或明矾苏木精(alum hematoxylin)染细胞核10~15分钟,充分水洗

⑹必要时用盐酸酒精分色,自来水洗至切片呈蓝色

⑺丽春红品红液染色5~10分钟,用滤纸沾干

丽春红品红液:蒸馏水100毫升,依次溶解:丽春红0.8克,酸性品红0.4克,冰醋酸1毫升

⑻0.5%醋酸水溶液洗30~60秒,蒸馏水略洗

⑼1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色

⑽1%醋酸水溶液洗30秒

⑾2%亮绿液染色3~5分钟

亮绿液:蒸馏水98毫升,亮绿Y2克,冰醋酸2毫升

⑿1%醋酸水溶液洗涤

⒀95%酒精和无水酒精脱水各1分钟

⒁二甲苯透明,中性树胶封片

结果:胶原纤维绿色;弹性纤维棕色或深棕色;肌纤维红色;纤维素红色;红细胞红色;细胞核蓝黑色

可用地衣红染弹性纤维。分色时镜检。醋酸分色不要过度。亮绿可用苯胺蓝代替

附:Weigert铁苏木精染色法

两液分别配制,用时混合。只能用几次。

A液:1%苏木精(95%酒精)溶液  10毫升

B液:29%氯化铁(ferric trichloride)水溶液4毫升,盐酸(25%)1毫升,蒸馏水95毫升

(三氯化铁1.16克,蒸馏水98毫升,盐酸1毫升)

使用时将A、B两液等量混合(各50毫升),染色数分钟。

附:明矾苏木精

1  Hansen铬明矾苏木精

4%铬明矾水溶液:铬明矾(chromic potassium sulfate)10克溶于蒸馏水250毫升,煮沸至溶液呈绿色

苏木精(haematoxylin)1克溶于热蒸馏水15毫升

10%硫酸(2N)水溶液:浓硫酸(sulfuric acid)10毫升,蒸馏水90毫升

2.76%重铬酸钾水溶液:重铬酸钾(potassium dichromate )0.552克溶于蒸馏水20毫升

充分振荡混合;

再加10%硫酸(2N)5毫升

苏木精水溶液倒入铬明矾液,充分振荡混合,加入硫酸液5毫升

倒入重铬酸钾液20毫升,煮沸1~2分钟。待溶液冷却后过滤。

此液保存性好,不会过染,也不易褐色

染30秒至2分钟,可使细胞核呈蓝黑色;若硫酸减至1~3毫升,可使细胞浆着色,也能染神经元内的尼氏体(虎斑)

2 Mayer酸性明矾苏木精

苏木精1克,蒸馏水100毫升;碘酸钠(sodium iodate )0.2克,钾明矾(aluminium potassium sulfate)50克。加温溶解,溶液呈蓝紫色。

加水合氯醛(chloral hydrate)50克,枸橼酸(citric acid)1克,溶液呈红紫色。能长久保存。陈液着色力较强。可用2%钾明矾水溶液稀释,染后流水洗至细胞核至深蓝色。

切片染色4~6分钟,小块组织染24小时。

3 Mayer钾明矾苏木红

苏木红(haematein)1克溶于95%酒精50毫升,稍加温溶解。加5%钾明矾(aluminium potassium sulfate)水溶液100毫升,最后加樟脑(camphor)少许防腐。

4  Delafield苏木精

苏木精4克溶于无水酒精25毫升,倒入10%铵明矾(aluminum ammonium sulfate)水溶液400毫升,置有光处3~4天,过滤,加甘油(glycerin)和甲醇(methanol)各100毫升。数日后过滤。能长久使用。

此液对细胞核和嗜碱性物质染色效果很好。着色力强。

一般染色数分钟;也可用蒸馏水稀释50~100倍,染色4~24小时。

5  Ehrlich酸性苏木精

苏木精2克溶于95%酒精100毫升,加蒸馏水及纯甘油各100毫升、钾明矾3克、冰醋酸10毫升。混合后溶液呈红色。用纱布封闭瓶盖,2周后成熟,溶液呈暗红紫色。

切片染数分钟。

此液适合于块染,需用蒸馏水或50%酒精稀释4~5倍,小块组织染1~2天。

6  Harris苏木精

10%苏木精(95%或无水酒精)溶液10毫升与10%钾明矾水溶液(加热溶解)200毫升混合于1000毫升烧瓶内。继续加热煮沸1分钟,停火,缓慢加氧化汞(mercuric oxide)0.5克,再加热煮沸1分钟。迅速将三角烧瓶放入冷水中冷却。可加冰醋酸5~10毫升,加强细胞核的着色能力。

切片染色约3~10分钟。

不适合整块组织染色。

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