裸鼠成瘤实验原理及详细步骤

从体外细胞试验到动物水平体内试验，是基因功能研究的重要飞跃。动物实验，由于其更能模拟人类的生理和病理条件，在科研上，动物实验获得的结果，将有更强的说服力。肿瘤研究中，最常规的动物实验就是裸鼠成瘤实验。由于大部分肿瘤研究使用的是人类细胞，所以由于异种排斥的存在，我们需要免疫缺陷型小鼠来作为移植瘤模型的载体，通过对该小鼠的注射肿瘤细胞，使其成瘤，观察流体的生长来判断其生物学变化。

实验室常用的是BALB/c-nu裸小鼠 ,随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸鼠体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验一般采用4--6周龄的裸鼠。

裸鼠成瘤实验技巧

1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，目的为去除细胞中残余的血清。

3、用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度，一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的生成，基质胶与PBS或无血清的比列为1:1。

4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成（如果接种量大，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。

5、选择的裸鼠一般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部。

6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率，并且导致小鼠接种细胞数量的差异过大。

7、接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，针头在皮下左右滑动几次，以便细胞接种成团，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

8、如何保定裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴。

9、接种后1-2周左右可以见到皮下开始出现肿块。

10、根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大，一般不要超过2000mm3。

11、肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2*a*b2 (a为长轴，b为短轴)。

12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。