辣根过氧化物酶标记的刀豆凝集素(HRP-ConA)/欧曼陀罗凝集素/麦胚凝集素

辣根过氧化物酶标记的刀豆凝集素(HRP-ConA)/欧曼陀罗凝集素/麦胚凝集素

辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序

 

    1．组织切片脱蜡处理等同前；

 

    2．流水冲洗5分钟，3％H₂O₂孵育10分钟(阻断内源性过氧化物酶，避免假阳性)；

 

    3．PBS漂洗3次，每次5分钟；

 

    4．1％牛血清白蛋白孵育，室温20分钟，移去多余液体；

 

    5．加入PBS稀释的辣根过氧化物酶―凝集素，置湿盒内孵育。室温1．5小时；

 

    6．PBS漂洗3次．每次5分钟；

 

    7．呈色  DAB液(配制：DAB 5mg，pH 7．6 Tris―HCl 10ml，3％H₂O₂ 40ul)室温暗处10―15分钟；

 

    8．蒸馏水洗5分钟，流水短暂冲洗后，常规乙醇脱水，二甲苯透明，封片；

 

    9．光镜观察?阳性反应部位呈棕褐色。

 

    10．注意事项

    (1)为防止染色过程中切片脱落，载玻片可用铬矾/明胶或赖氨酸等黏片剂处理；

    (2)脱水时与普通石蜡切片不同，70％乙醇时间不宜太长，以免阳性反应褪色；

    (3)辣根过氧化物酶―凝集素的最佳工作浓度亦需经预实验确定；

    (4)H₂O₂对碳水化合物有一定影响，可能改变凝集素的结合情况，但影响不显著。

wyf 03.30