【2018-17期】This Week in Extracellular Vesicles
贝克曼库尔特 纳米流式细胞仪，外泌体提取鉴定新方案！
本周hzangs在最新文献中选取了16 篇分享给大家，其中8篇提供中文摘要。第1篇文章介绍了RAB35介导形成的细胞外囊泡对肿瘤生长的支持作用，文章发现了不同调控途径产生的细胞外囊泡可能具有不同的功能，也暗示了通过调控途径对细胞外囊泡进行亚群区分的可行性；第2篇文章是只有3个figure的报道，文章的意义还不错，值得大家学习；第4篇文章涉及到细胞表面和囊泡表面蛋白识别在囊泡内化过程中的作用；第9篇文章介绍了使用405nm激发光测侧向散射用于高灵敏流式细胞仪分析细胞外囊泡可以取得更好的效果。其余各文章也各有特色，感兴趣的可以读读。相关文章的原文在周一前会发布到论坛同名贴下，需要的可以到论坛下载。
1. Rab35-dependent extracellular nanovesicles are required for induction of tumour supporting stroma.Rab35依赖性细胞外纳米囊泡是肿瘤生存所需支持基质中的必须成分。[Nanoscale] IF=7.367 PMID：29693684
摘要：病变细胞与微环境之间的沟通是各种病理过程发展过程中复杂但至关重要的因素。最近的癌症研究突出了癌细胞分泌的小细胞外纳米囊泡作为癌症相关基质的调节剂的重要作用，它们可以导致诸如增强的血管生成和转移。因此研究调控细胞外纳米囊泡生物发生和分泌的内在因素在癌症环境中近距离通讯的作用具有重要意义。我们利用前列腺癌细胞，产生了稳定敲低不同囊泡调节因子的细胞系。检测了对细胞健康，囊泡分泌和与成纤维细胞基质细胞交流的影响。我们发现，RAB11B和RAB35调节具有不同表型功能的纳米囊泡群体，每个仅占总数的约20％。消耗RAB35后，剩余的囊泡群不足以驱动成纤维细胞向肌成纤维细胞分化，能够导致3D体外模型中的运动行为减弱，而消耗RAB11B没有这样的效果。肿瘤细胞与异种移植物中基质成纤维细胞的共同植入类似地表明RAB11B敲减对体内生长速率的影响很小。相反，当使用RAB35敲低细胞时，生长的显着减弱，肌成纤维细胞在肿瘤部位也明显减弱。该研究得出结论认为，RAB35调控的纳米囊泡亚群对于癌症和基质细胞之间的通讯尤为重要，并且是产生肿瘤支持性微环境所必需的。
PS：这篇文章介绍了不同调控途径产生的细胞外囊泡对肿瘤微环境具有不同的功能。文章报道发现RAB35调控产生的细胞外囊泡对肿瘤细胞微环境中的成纤维细胞转变成肿瘤相关成纤维细胞具有重要作用，敲低RAB35能够显著抑制肿瘤相关成纤维细胞的产生。文章结论表明不同调控途径产生的不同囊泡亚群可能存在着功能特化显现。这表明从母细胞角度根据不同的调控途径区分不同的囊泡亚群具有现实意义。
2. Circulating extracellular vesicles as potential biomarkers in chronic fatigue syndrome/myalgic encephalomyelitis: an exploratory pilot study..循环细胞外囊泡作为慢性疲劳综合征/肌痛性脑脊髓炎的潜在生物标志物：一项探索性试点研究。[J Extracell Vesicles] PMID：29696075
摘要：慢性疲劳综合征（CFS）也称为Myalgic Encephalomyelitis（ME），是一种未知病因的后天性复杂多系统疾病，目前没有建立实验室诊断标准，也没有通过FDA批准的治疗药物。CFS / ME的特征在于无法解除的疲劳并且通常与许多核心症状相关。越来越多的证据表明细胞外囊泡（EV）在细胞间通讯中发挥作用，并参与生理和病理过程。迄今为止，还没有关于CFS / ME的EV生物学数据。本研究的目的是分离和表征CFS / ME中血源性EV。从10名西班牙CFS / ME患者和5名匹配的健康对照（HC）收集血液样品，并且使用基于聚合物的方法从血清中分离EV。通过蛋白质印迹和纳米颗粒追踪分析测量它们的蛋白质货物，尺寸分布和浓度。此外，使用基于生物标志物CD9和CD63的侧流免疫测定法检测EV。我们发现，CFS / ME患者的EV富集部分的数量明显高于HCs（p = 0.007），而CFS / ME患者的EV直径明显偏小（p = 0.014）。细胞外囊泡可能成为CFS / ME中生物医学研究的新兴工具。这些发现提供了初步证据，说明血源性EV可以将CFS / ME患者与HC区分开来。这是鉴定这一疾病的新的潜在生物标志物。
PS：发表在JEV上的利用血浆细胞外囊泡来诊断特定疾病的报道。文章仅使用了EV的数量和直径来作为诊断标准。只有3个图，思路简单，结论单一。发表在了JEV上。3个图哦，只需要1个月的时间就可以完成的数据量。但它确实为目前没有诊断标准的疾病提供了潜在的诊断手段。大家可以学习学习，如何用少量的数据投高分的文章，当你的文章可以让一个方面的研究有哪怕一点点实质性的进展时，你不需要太多数据就可以投一个不错的文章。这篇文章是个不错的例子，也是一个不错的套路参考。
3. Newt cells secrete extracellular vesicles with therapeutic bioactivity in mammalian cardiomyocytes.蝾螈细胞分泌具有治疗性生物活性的细胞外囊泡用于哺乳动物心肌细胞保护。[J Extracell Vesicles] PMID：29696078
摘要：与缺乏广泛再生能力的哺乳动物不同，蝾螈可以使被截肢的肢体和心脏组织再生。大量研究已经阐明在蝾螈组织再生期间涉及细胞增殖，分化和存活的几种信号传导途径，然而，协调细胞间信号传导的因子以及这些因子在其他动物中的保守性尚未明确定义。在这里我们研究发现，蝾螈外植体细胞（A1细胞）条件培养液能够保护哺乳动物心肌细胞免受氧化应激诱导的细胞凋亡。A1条件培养基的细胞保护作用能够通过将A1细胞暴露于抑制细胞外囊泡（EV）的产生的GW4869而消失。A1-EV在直径（〜100-150nm），结构上与哺乳动物外泌体相似，并且共享几种膜表面和货物蛋白质。然而，与哺乳动物细胞外囊泡相比，分离纯化的A1-EV每颗粒含有显着更高水平的RNA和蛋白质。此外，许多货物RNA和蛋白质是A1-EV所独有的。特别值得注意的是，A1-EV包含许多编码核受体，膜配体以及转录因子的mRNA。用A1-EV处理的哺乳动物心肌细胞显示PI3K / AKT途径中基因的表达增加，这是存活信号的关键参与者。我们得出结论，蝾螈细胞分泌细胞外囊泡具有不同的，独特的RNA和蛋白质内容物。尽管蝾螈和哺乳动物之间有3亿年的进化分歧，但蝾螈细胞来源的细胞外囊泡具有对哺乳动物心肌细胞的细胞保护作用。
PS：这篇文章很值得推荐哦。生物学背景的朋友应该都知道蝾螈这种神奇动物的存在。这种两栖动物可以在肢体缺失后进行肢体再生，甚至在心脏损伤后都可以进行修复再生。如此强大的再生能力让哺乳动物望尘莫及，而人们很早就开始研究蝾螈的再生机理，但3亿年的进化分歧让我们很难利用蝾螈细胞，因此目前没有有效的临床医学转化。本文的作者做了一个大胆的尝试，直接使用蝾螈细胞的细胞外囊泡处理人心肌细胞，取得了意想不到的成果。目前干细胞领域的朋友们也尝试过使用间充质干细胞来源的细胞外囊泡用于组织修复，两者有异曲同工之妙。感兴趣的可以读读，毕竟这个还是很有新意，同时也很有临床意义的研究。
4. Glycosylated extracellular vesicles released by glioblastoma cells are decorated by CCL18 allowing for cellular uptake via chemokine receptor CCR8.由胶质母细胞瘤细胞释放携带有糖基化的细胞外囊泡具有CCL18修饰，能够通过趋化因子受体CCR8进行细胞摄取。[J Extracell Vesicles] PMID：29696074
摘要：癌细胞释放含有功能性生物分子如RNA和蛋白质的细胞外囊泡（EV）。细胞外囊泡被转移到受体癌细胞中，并可以促进肿瘤进展和治疗抵抗。通过RNAi筛选，我们发现了一种新的EV摄取机制，涉及细胞上的趋化因子受体CCR8，EV上暴露的聚糖和可溶性配体CCL18之间的三重相互作用。该配体充当桥接分子，将EV连接至癌细胞。我们发现胶质母细胞瘤EVs促进细胞增殖和对烷化剂替莫唑胺（TMZ）的抗性。使用体外和体内干性样胶质母细胞瘤模型，我们证明EV诱导表型被小分子CCR8抑制剂R243所中和。干扰趋化因子受体可能为胶质母细胞瘤中EV介导的细胞间信号通信提供治疗靶点。
PS：文章研究了肿瘤细胞来源细胞外囊泡的摄取过程，发现了CCL18、聚糖和CCR8三重相互作用在细胞外囊泡被受体细胞内化过程中的重要作用。通过抑制CCR8实现了对胶质瘤细胞来源细胞外囊泡的靶细胞内化抑制。
5. The Secretion of miR-200s by a PKCζ/ADAR2 Signaling Axis Promotes Liver Metastasis in Colorectal Cancer.通过PKCζ/ ADAR2信号轴调控miR-200s通过外泌体的分泌，影响结直肠癌的肝转移。[Cell Rep] IF=8.282 PMID：29694894
摘要：大多数结肠直肠癌（CRC）相关的死亡是由肝转移引起的。PKCζ是CRC中的肿瘤抑制基因，其在转移瘤中的表达降低。鉴于microRNA（miRNA）在调控细胞可塑性中的重要性，我们进行了无偏差筛选，并将miR-200家族鉴定为与PKCζ缺陷下调最相关的miRNA。PKCζ调节miR-200的细胞内水平是在转录后水平调控的并涉及它们通过细胞外囊泡的分泌。在这里，我们将ADAR2鉴定为CRC细胞中PKCζ的直接底物。ADAR2的磷酸化能够调节其编辑活性，这是维持miR-200稳态水平所需的，表明PKCζ/ ADAR2轴通过RNA编辑调节miR-200分泌。该轴的损失导致上皮- 间质转化（EMT）和肝转移增加，其可通过阻断miR-200释放而在体内被抑制。因此，通过调节miR-200水平，PKCζ/ ADAR2轴是CRC转移的关键调节剂。
PS：文章第一眼看上去好像没什么特别的，常规的外泌体miRNA研究报道。但好好读读摘要就会发现这篇文章的不同之处。文章主要介绍了外泌体母细胞的一些行为。文章发现了CRC通过调控影响miRNA进入细胞外囊泡的相关蛋白来改变自身miRNA水平。有点像把细胞外囊泡当做垃圾桶的意思。
6. Molecular mechanism to recruit galectin-3 into multivesicular bodies for polarized exosomal secretion. 乳糖凝集素-3募集到多泡体中用于方向性外泌体分泌的分子机制。[Proc Natl Acad Sci U S A] IF=9.661 PMID：29686075
摘要：β-半乳糖苷结合凝集素半乳糖凝集素-3（Gal3）在细胞内和细胞外空间均有发现。这种凝集素的分泌通过尚未确定的非经典机制而独立于分泌途径存在。在这里，我们发现Gal3在外泌体的腔中。超分辨率和电子显微镜研究显示Gal3募集和分选到管腔内囊泡。外泌体Gal3释放取决于运输所需的内体分选复合物I（ESCRT-I）组分Tsg101和功能性Vps4a。Tsg101敲低或表达显性失活的Vps4aE228Q能够导致胞内Gal3在多泡体形成位点积累。另外，我们在Gal3的氨基末端鉴定了高度保守的四肽P（S / T）AP基序，其介导与Tsg101的直接相互作用。P（S / T）AP基序的突变导致相互作用的丧失和外泌体Gal3分泌的显着降低。我们得出结论，Gal3是内源性非ESCRT蛋白质的成员，其是P（S / T）AP为外泌体释放而标记的。
PS：发表在PNAS上的文章，介绍了TSG101和Vps4a通过Gal3氨基末端四肽基序将其分选进入多泡体。文章涉及到了ESCRT非依赖性的膜泡内容物选择机制，这是外泌体研究中外泌体形成早期的相关机制，感兴趣的可以读读。
7. Role of exosomes as a proinflammatory mediator in the development of EBV-associated lymphoma.外泌体作为促炎性介质在EBV相关淋巴瘤发展中的作用。[Blood] IF=13.164 PMID：29685921
摘要：爱泼斯坦- 巴尔病毒（EBV）在老年人中引起各种疾病，包括B细胞淋巴瘤如霍奇金淋巴瘤（HL）和弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）。在这里，我们研究发现EBV通过外泌体分泌反式作用于肿瘤中的未感染巨噬细胞并增强淋巴瘤的发展。在人源化小鼠模型中，两种EBV毒株（Akata和B95-8）对淋巴组织增生性疾病（LPD）的发病影响明显不同。此外，注射Akata衍生的外泌体可能通过体内巨噬细胞表型的调节影响LPD严重性。据报道，从Akata-淋巴母细胞系（LCL）收集外泌体含有EBV衍生的非编码RNA，如BamHI片段A向右转录物（BART）miRNA和EBV编码的RNA（EBER）。我们专注于外泌体介导的BART miRNA的递送。在体外，BART miRNA可诱导以白细胞介素-10，肿瘤坏死因子-α和精氨酸酶1的基因表达为特征的免疫调节型巨噬细胞表型，表明BART miRNA的免疫调节作用。EBV编码的miRNA的表达水平与老年弥漫大B细胞淋巴瘤患者的临床结果密切相关。这些结果暗示BART miRNAs是调节淋巴增殖性疾病严重程度的因素之一，并且是EBV + B细胞淋巴瘤的诊断标志物。
PS：免疫学基础不扎实，因此hzangs对这篇文章摘要的翻译可能存在错误，欢迎指正。这篇文章主要介绍了EBV病毒相关淋巴瘤中外泌体作为促炎性介质的作用。
8. Comparison of exosomes and ferritin protein nanocages for the delivery of membrane protein therapeutics.用于递送膜蛋白治疗剂的外泌体和铁蛋白蛋白纳米笼的比较。[J Control Release] IF=7.786 PMID：29679665
摘要：外泌体是由在细胞间通讯中起重要作用的大多数细胞类型分泌的小膜囊泡。由于转移其生物大分子的特性，外泌体作为递送蛋白质治疗剂载体具有诱人的潜力。在这里，我们研究了外泌体是否能够提供超过其他纳米粒子，特别是蛋白质纳米笼制剂的关键优势。我们表征了基于膜支架的外泌体和基于蛋白质支架的铁蛋白纳米囊，它们均携带CD47在肿瘤细胞上的拮抗剂——SIRPα（信号调节蛋白α）。通过测试它们通过骨髓来源的巨噬细胞增强对肿瘤细胞的吞噬作用和随后抑制体内肿瘤生长的能力来比较这两种系统在递送蛋白质治疗剂中的功效。这些分析使我们能够综合地得出结论，外泌体介导的CD47阻断对肿瘤生长抑制的治疗指数高于相同剂量的铁蛋白-SIRPα。该分析的结果揭示了与基于蛋白质支架的纳米笼相比，外泌体的独特特征（特别是其膜支架）在改善治疗性蛋白质递送中的重要性。
PS：文章比较了外泌体和蛋白纳米笼对递送蛋白类药物的功能效果。对比发现外泌体具有更好的治疗效果。
9. Improved resolution in extracellular vesicle populations using 405 instead of 488 nm side scatter.使用405代替488nm用于侧向散射可提高细胞外囊泡群体的分辨率。[J Extracell Vesicles] PMID：29696076
PS：一篇涉及到流式细胞仪分析细胞外囊泡的改新方法报道。文章主要介绍了使用高灵敏流式细胞术分析细胞外囊泡亚群时通过使用405nm的光替代488nm的光来测量侧向散射值，从而改善目前高灵敏流式细胞仪对细胞外囊泡的分析分辨率。
10. Pathogen-derived extracellular vesicles mediate virulence in the fatal human pathogen Cryptococcus gattii.病原体来源的细胞外囊泡介导致命的人病原体Cryptococcus gattii的毒力。[Nat Commun] IF=12.124 PMID：29674675
PS：文章主要研究了病原体来源的细胞外囊泡介导病原体毒力的情况。阐释了细胞外囊泡介导病原体毒力的分子机制。
11. Designer exosomes alleviate neurotoxicity工程设计的外泌体用于缓解神经毒性.。[Nat Rev Neurol] IF=20.257 PMID：29691491
PS：“Designer exosomes produced by implanted cells intracerebrally deliver therapeutic cargo for Parkinson’s disease treatment.”对这篇文章的短评述。
12. VDR signaling inhibits cancer-associated-fibroblasts' release of exosomal miR-10a-5p and limits their supportive effects on pancreatic cancer cells.VDR信号抑制癌症相关成纤维细胞释放外泌体miR-10a-5p并限制其对胰腺癌细胞的支持作用。[Gut] IF=16.658 PMID：29695492
PS：一篇发表在Gut上的letter。全文只有1个figure。但研究意义还是很好的。感兴趣可以读一读。
13. Proteomic analysis reveals different composition of extracellular vesicles released by two Trypanosoma cruzi strains associated with their distinct interaction with host cells.蛋白质组学分析揭示了两种克氏锥虫菌株与它们与宿主细胞的不同相互作用相关的释放的细胞外囊泡的不同组成。[J Extracell Vesicles] PMID：29696081
PS：囊泡蛋白质组学的分析文章。没有什么太大的新意。之所以推荐给大家是提醒大家关注文章使用的细胞外囊泡分离方法。考虑到这篇文章介绍的是蛋白质组学内容，同时是发表在JEV上，就比较有借鉴意义了。主要提醒大家关注该文章研究细胞外囊泡蛋白质组学时候使用的各种方法。
14. Drug-induced senescent Multiple Myeloma cells elicit NK cell proliferation by direct or exosome-mediated IL-15 trans-presentation.药物诱导老化的多发性骨髓瘤细胞通过直接或外泌体介导的IL-15递呈引起NK细胞增殖。[Cancer Immunol Res] IF=8.284 PMID：29691234
PS：比较常规思路的一篇文章。介绍了药物诱导的老化瘤细胞会释放IL-15直接或者通过外泌体诱导NK细胞增殖。
15. Nanoparticle Tracking Analysis of Urine to Detect Exosomes Can Be Confounded by Albuminuria.纳米粒子追踪分析检测尿液外泌体时可能与尿液里白蛋白混淆。[J Am Soc Nephrol] IF=8.966 PMID：29695438
PS：hzangs目前还没有拿到这篇文章的原文。不知道周一之前能不能搞定这个原文。从文章题目看，文章是质疑了NTA技术在分析尿液外泌体时是否可以与尿里的蛋白进行区分。是对目前方法学中一些不足之处的报道。大家适当关注一下。
16. Diagnostic and prognostic roles of circulating exosomal microRNAs in acquired aplastic anemia and myelodysplastic syndromes.循环exosomal microRNAs在获得性再生障碍性贫血和骨髓增生异常综合征中的诊断和预后作用。[Haematologica] IF=7.702 PMID：29674506
PS：一篇循环外泌体miRNA作为疾病诊断标志物的文章报道。
编辑：土豆
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