CRISPR/Cas9基因脱靶作用

由于CRISPR/Cas9系统简单易用，可以对几乎任意基因进行基因编辑，所以收到广泛欢迎，成为科学研究一种极其重要的工具。它已被迅速而广泛地采用，包括用于人类细胞研究。从根本上说，CRISPR/Cas9系统可以靶定活细胞中的任何基因组区域，并改变遗传信息，这在过去几十年里一直是研究中的圣杯。从根本上说，能够靶定和改变活细胞中的遗传信息，是一个梦想。

但是 CRISPR/Cas9基因编辑系统有潜在的脱靶作用。对指定基因位点进行编辑的同时，可能导致基因组上数个相似位点的突变。为了解决这一问题，Church实验室研究了D10A突变的Cas9蛋白（Cas9Nickase）。Cas9 Nick蛋白与野生型Cas9蛋白不同，Cas9Nickase蛋白结合gRNA后对DNA进行单链切割，产生一个DNA缺口。单独Cas9Nickase产生的缺口产生的缺口一般会被修复，不会产生DNA突变。使用一对gRNA同时对DNA进行切割，可使DNA断裂，从而通过同源重组或者邻端接合产生实现基因敲除。