锦旗高光 | 口腔益生菌研究新突破——国内首个口腔益生菌片剂IRB临床试验完成并发表SCI期刊
3月25日，锦旗生物集团研发中心又传来创新成果：国内首个口腔益生菌片剂IRB临床试验完成，并在SCI期刊发布。
此次临床试验是锦旗生物集团作为中国第一个自主研发知识产权三株菌（唾液乳杆菌AP-32、 副干酪乳杆菌 ET-66、和植物乳杆菌 LPL28 的）以口腔益生菌片剂的形式国内首个通过IRB审核口腔益生菌含片的临床RCT试验，取得了口腔益生菌功效人体验证方面的4项新突破。结果发表在《Oral Diseases》SCI期刊（影响因子：2.613）上。这意味着中国预防龋齿大健康领域迎来益生菌活菌有效的新证据，将造福中国口腔疾病患者。
四项新突破
为口腔益生菌研究开启新赛道
本试验临床试验发现唾液乳杆菌 AP-32 (Lactobacillus salivarius subsp. salicinius)、副干酪乳杆菌 ET-66 (Lactobacillus paracasei)、植物乳杆菌 LPL28 (Lactobacillus plantarum)是十分有效的口腔保健食品添加菌菌株。不仅可以有效降低口腔内变形链球菌菌数、改善口腔内微生物菌相、增加唾液内 IgA 抗体的表现、减少口腔感染，还可以改善受试者的肠道症状，缓解便秘、减少胃食道逆流和胃痛、降低感冒发生率及每天的昏沉感。比起去活性菌体及益萃质，具活性的益生菌菌株(viable probiotics)之口腔保健功能更为显著，是最优良的口腔保健食品添加物。
本次试验成果备受瞩目，主要有以下四项创新突破：
1、 试验方式经科学验证：通过医院伦理委员会正式审批，经医学、药学、法律专家审查试验方式合理具有科学可实施性。
2、 可信度区间高：使用循证医学等级最高、临床研究的金标准——RCT随机双盲对照来进行试验，促进口腔健康的结果具有更高可信性。
3、 测试技术突破：国内首个从基因测序的角度来验证使用益生菌后对人体口腔微生物影响分析，使用新一代高通量测序NGS技术。
4、 口腔益生菌剂型突破：国内首个口腔益生菌含片临床试验，锦旗生物首次将三株口腔专利益生菌应用在口腔益生菌含片上进行临床效果验证。
口腔益生菌解决方案专家
守护中国国民口腔大健康
口腔健康是全身健康的基础，全球近一半人口患有口腔疾病，针对国人口腔问题，锦旗生物早在多年前就已致力于口腔益生菌领域的科研实践与应用。从独有菌种库上千株菌株筛选选拔出来专利口腔益生菌配方，打造完整针对口腔功效价值的整体解决方案。此次使用包含唾液乳杆菌AP-32、 副干酪乳杆菌 ET-66、和植物乳杆菌 LPL28 的片剂进行的随机对照试验验证了含锦旗生物集团口腔专利益生菌菌株的口含片可以增强口腔免疫反应同时有助于口腔健康。
试验意义
研究已知资讯
许多报道表明，食用益生菌，如乳酸杆菌和双歧杆菌，可以通过分泌抗菌物质来平衡微生物，与口腔病原体竞争的营养物质，加强粘膜屏障，减少生物膜形成，改善口腔微生态。此外，服用益生菌还可以使口腔变形链球菌数量减少，牙菌斑减少。因为益生菌可以与口腔的病原菌彼此竞争口腔内养分，抑制其生长并可以加强黏膜的分泌与屏蔽，可有效降低病原菌的附着性并且改善口腔内的微生物相，除此之外，益生菌亦可分泌抑菌物质如抗菌肽及短链脂肪酸达到降低致病菌的存活度，以及降低因致病菌感染所导致的发炎现象(Lin et al., 2017; Villavicencio et al., 2018)。并抑制口臭。
研究新发现
我们研究发现，下一代测序NGS结果显示，食用添加混合益生菌（唾液乳杆菌AP-32、 副干酪乳杆菌 ET-66、和植物乳杆菌 LPL28）含片的受试者口腔中唾液乳杆菌的口腔微生物群显著增加。两周内观察活菌的抗菌活性。试验组患者口腔内IgA水平及乳酸杆菌和双歧杆菌丰度均显著升高。大多数参与者报告说，他们的口腔健康状况和肠道症状得到了改善。
研究临床应用
我们研究证实，(液乳杆菌AP-32、 副干酪乳杆菌 ET-66、和植物乳杆菌 LPL28)益生菌可作为口腔保健的辅助食品。
试验设计
试验模式
招募了20至40岁的健康成年人。其中，吸烟者和全身疾病者被排除在外。50名每毫升唾液中显示超过105个变形链球菌cfu的参与者被邀请参加这项临床研究，并随机分为两组：安慰剂组和益生菌口含片组。
试验流程
牙齿彻底清洁后，每位参加者可每天服用三粒3g 3X109CFU活菌口服含片（早、中、晚/餐后服用），为期4周。收集第0、2和4周的唾液样本，分析口腔微生物区系、IgA水平和口腔病原体丰度。在第0、2和4周进行了关于改善口腔健康的问卷调查。口腔中的牙菌斑总数被采集称重。
检测方法
lgA和牙菌斑的分析：lgA使用人类IgA ELISA工具，而牙菌斑脱水后称重；口腔微生物和病原体的分析：唾液样品分别用杆菌肽、平板计数琼脂(PCA)和MRS用0.05%半胱氨酸琼脂肉汤在唾液腺炎培养基上镀一式三份，分别检测变形链球菌、口腔细菌总数、乳酸杆菌和双歧杆菌。同时，对口腔微生物群进行了NGS分析；常见牙齿问题及胃肠道评估：问卷调查。
试验结果
AP-32、ET-66和LPL28是开发口腔保健功能食品最合适的菌株
体外抗致病性试验使用了一种改良的双层琼脂共孵育法来评价和选择口腔保健益生菌菌株。结果发现：AP-32、ET-66和LPL28是开发口腔保健功能食品最合适的菌株。
AP-32、ET-66和LPL28有助于口腔保健、胃肠健康和免疫力
口腔健康调查问卷分析结果（表一）显示食用含益生菌(去活性或具有活性)的口含片可以有效的减少嘴破及口腔内脓包的产生，进而减少口腔的细菌感染。益生菌或其益萃质的添加也可以进一步促进口水的分泌，可以保持口腔湿润，口水中的IgA更有预防细菌感染的效果。此外，食用具活性的AP-32, ET-66及LPL28还可以显著减少咽喉炎及喉咙痛的发生。肠道症状健康调查分析结果(表二)中，发现具活性的益生菌可以有效减少胃痛发生率，而食用含活性或去活性益生菌或其益萃质的口含片皆可以在4周内改善便秘情形，而在食用4周后，胃食道逆流发生率、感冒发生率、每天昏沉感都有显著下降。总之，食用益生菌或其益萃质的口含片除了可以有效减少口腔内病原菌，改善口腔内菌相，还可以有效改善受试者的肠道症状，缓解便秘、减少胃食道逆流和胃痛、降低感冒发生率及每天的昏沉感。
(表一）
(表二）
口腔中的变形链球菌、口腔细菌总数、乳酸杆菌和双歧杆菌分析
口服具有活性益生菌菌株AP-32，ET-66和LPL28的口含片，可以有效的在第2周时显著降低口腔内变形链球菌菌数达45%，并于第四周时显著降低了72%。在口腔中的生物负荷显著降低。另外使用 PCA 琼脂平板分析口腔中的总环境细菌数。
数据表明，具有活性益生菌的施用显著减少了口腔中的细菌总数。口服益生菌含片增加了双歧杆菌和乳酸菌的口腔数量。
(图二）
NGS数据显示，口服益生菌含片增加了口腔微生物数量
我们分析了口服含片是否含有活菌，唾液乳杆菌亚种。水杨杆菌AP-32、副干酪乳杆菌ET-66和植物乳杆菌LPL28影响了NGS对口腔总微生物群的影响。饲喂益生菌含片后，未分类乳酸菌数量与安慰剂组相比有统计学差异(益生菌组= 100;安慰剂组= 4;p < 0.05)。与安慰剂组相比，益生菌组的牙双歧杆菌水平略有升高(p < 0.05)。然而，与基线相比，食用益生菌含片并没有增加双歧杆菌数量(图三)。与安慰剂组相比，唾液乳酸杆菌水平(益生菌组= 200;安慰剂组= 6，***p < 0.001)服用口服含片后显著增加(图3)。NGS结果与图所示MRS培养测试结果一致。
(图三）
IgA检测结果显示，益生菌能改善IgA水平改善口腔状况
此外，益生菌还能刺激唾液分泌，保持体内水分补充口服含片后，唾液中IgA含量升高。唾液和抗体的增加可能是口腔疾病减少的原因之一致病菌与咽喉发炎症状缓解(表二) (Monteiro, 2014)。需要进一步的试验和长期的测试来证实这些结果。
试验结论
本试验临床试验发现唾液乳杆菌 AP-32 (Lactobacillus salivarius subsp. salicinius)、副干酪乳杆菌 ET-66 (Lactobacillus paracasei)、植物乳杆菌 LPL28 (Lactobacillus plantarum)是十分有效的口腔保健食品添加菌菌株。不仅可以有效降低口腔内变形链球菌菌数、改善口腔内微生物菌相、增加唾液内 IgA 抗体的表现、减少口腔感染，还可以改善受试者的肠道症状，缓解便秘、减少胃食道逆流和胃痛、降低感冒发生率及每天的昏沉感。比起去活性菌体及益萃质，具活性的益生菌菌株(viable probiotics)之口腔保健功能更为显著，是最优良的口腔保健食品添加物。
当前，中国口腔保健需求日益增长，政策利好不断，无论是市场需求、行业成长空间还是社会责任，口腔益生菌领域都急需力量注入。针对国人口腔问题，锦旗生物早在多年前就已致力于口腔益生菌领域的科研实践与应用。从独有菌种库上千株菌株筛选选拔出来，综合评比，潜力配方组合及优势剂型设计，并与台湾口腔及牙医学权威机构「中山医学大学」合作进行人体临床试验，研发出市场领先临床实证的专利口腔益生菌配方，打造完整功效价值的整体解决方案。扎根益生菌领域数十载，锦旗生物不仅是专业的益生菌品牌原料供应商，更是口腔益生菌解决方案专家，未来也将肩负“中国好菌 守护健康”使命，持续守护中国国民口腔大健康，推动中国口腔益生菌新未来！