Transwell小室实验注意事项

1.根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber。常用的为8.0-μm孔径，如果细胞体积较大可以考虑用10-μm孔径；

2.细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平；

3.不能产生气泡：下层培养液和小室间易产生气泡，可导致下层培养液的趋化作用减弱甚至消失，一旦产生气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板中；

4.细胞密度为1-10×105，不要超过5×105；

5.处理组和对照组细胞密度要一致；

6.固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜表面上未迁移的细胞，以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；

7.充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。