乳酸脱氢酶(LDH)检测——简单便捷的比色法方案

乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LD 或LDH ,EC1.1.1.27 )是一类NAD依赖性激酶,有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基,可构成6种四聚体同工酶。动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体,常见的A、B两种亚基构成的5种LDH同工酶(LDH1-5),C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。

乳酸脱氢酶为含锌离子的金属蛋白,分子量为135-140kD,是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的α-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中,以肾脏含量最高,其次是心肌和骨肌。红细胞内LDH约为正常血清的100倍。

一、乳酸脱氢酶分类

1.根据结合辅酶的不同,微生物体一般包含两种乳酸脱氢酶,NAD-依赖型乳酸脱氢酶(NAD-dependent lactate dehydrogenases,nLDHs)和NAD-非依赖型乳酸脱氢酶(NAD-independent lactate dehydrogenases,iLDHs)两大类。

2.按其催化底物的构型不同,NAD-依赖型乳酸脱氢酶可以分为NAD依赖型-L-乳酸脱氢酶(L-NAD-依赖型乳酸脱氢酶)和NAD依赖型-D-乳酸脱氢酶(D-NAD-依赖型乳酸脱氢酶)两大类,分别催化丙酮酸合成L-乳酸和D-乳酸。

3.根据天然电子受体的不同,可以将NAD-非依赖型乳酸脱氢酶分为三类。第1类为膜蛋白,利用膜醌类作为外部的电子受体;第二类直接利用O2作为电子受体,根据氧化终产物的不同,又将其细分为乳酸氧化酶(Lactate oxidase,LOX)和乳酸单氧酶(Lactate monooxygenases,LMO),其中前者产生丙酮酸和H2O2,而后者产生乙酸、CO2和H2O;第三类是硫胺b2(flavocytochrome b2),存在于真丨菌中,它天然的电子受体为细胞色素c。

二、乳酸脱氢酶结构功能

研究表明,L-乳酸脱氢酶(L-LDH)和L-苹果酸脱氢酶属于同一家族,而D-乳酸脱氢酶(D-LDH)属于D-2-羟酸脱氢酶家族。

1.D-乳酸脱氢酶:大多数D-乳酸脱氢酶催化是可逆反应,极少数不可逆;对于可逆的D-乳酸脱氢酶来说,只有环境中乳酸浓度较高时才催化逆反应,即催化乳酸合成丙酮酸,来参与细菌的代谢。

2.L-乳酸脱氢酶:大多数乳酸菌中不仅存在D-乳酸脱氢酶也存在L-乳酸脱氢酶,L-乳酸脱氢酶催化丙酮酸还原生成L-乳酸。

三、乳酸脱氢酶检测工具

目前比较常见的乳酸脱氢酶(LDH)检测工具当然还是LDH试剂盒细胞毒性检测试剂盒啦。Abbkine 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(#KTA1030)为细胞毒性研究提供了一个简单便捷的比色法方案。

试剂盒组分: 实验缓冲液、乳酸溶液、MTT溶液、PES溶液、LDH阳性对照、NAD+溶液、Triton X-100 (10%)

特点&优势:

1.分析化合物或环境因素对细胞死亡的作用。

2.LDH从细胞内被释放到培养基中,形成了一个可视化的颜色反应。

3.检测范围:10,00-100,0000个细胞/孔。

文章来源:Abbkine

(0)

相关推荐