乳酸脱氢酶（LDH）检测——简单便捷的比色法方案

乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LD 或LDH ，EC1.1.1.27 ）是一类NAD依赖性激酶，有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基，可构成6种四聚体同工酶。动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体，常见的A、B两种亚基构成的5种LDH同工酶（LDH1-5），C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。

乳酸脱氢酶为含锌离子的金属蛋白，分子量为135-140kD，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。红细胞内LDH约为正常血清的100倍。

一、乳酸脱氢酶分类

1.根据结合辅酶的不同，微生物体一般包含两种乳酸脱氢酶，NAD-依赖型乳酸脱氢酶（NAD-dependent lactate dehydrogenases，nLDHs）和NAD-非依赖型乳酸脱氢酶（NAD-independent lactate dehydrogenases，iLDHs）两大类。

2.按其催化底物的构型不同，NAD-依赖型乳酸脱氢酶可以分为NAD依赖型-L-乳酸脱氢酶（L-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）和NAD依赖型-D-乳酸脱氢酶（D-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）两大类，分别催化丙酮酸合成L-乳酸和D-乳酸。

3.根据天然电子受体的不同，可以将NAD-非依赖型乳酸脱氢酶分为三类。第1类为膜蛋白，利用膜醌类作为外部的电子受体；第二类直接利用O2作为电子受体，根据氧化终产物的不同，又将其细分为乳酸氧化酶（Lactate oxidase，LOX）和乳酸单氧酶（Lactate monooxygenases，LMO），其中前者产生丙酮酸和H2O2，而后者产生乙酸、CO2和H2O；第三类是硫胺b2（flavocytochrome b2），存在于真丨菌中，它天然的电子受体为细胞色素c。

二、乳酸脱氢酶结构功能

研究表明，L-乳酸脱氢酶（L-LDH）和L-苹果酸脱氢酶属于同一家族，而D-乳酸脱氢酶（D-LDH）属于D-2-羟酸脱氢酶家族。

1.D-乳酸脱氢酶：大多数D-乳酸脱氢酶催化是可逆反应，极少数不可逆；对于可逆的D-乳酸脱氢酶来说，只有环境中乳酸浓度较高时才催化逆反应，即催化乳酸合成丙酮酸，来参与细菌的代谢。

2.L-乳酸脱氢酶：大多数乳酸菌中不仅存在D-乳酸脱氢酶也存在L-乳酸脱氢酶，L-乳酸脱氢酶催化丙酮酸还原生成L-乳酸。

三、乳酸脱氢酶检测工具

目前比较常见的乳酸脱氢酶(LDH)检测工具当然还是LDH试剂盒细胞毒性检测试剂盒啦。Abbkine 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒（#KTA1030）为细胞毒性研究提供了一个简单便捷的比色法方案。

试剂盒组分： 实验缓冲液、乳酸溶液、MTT溶液、PES溶液、LDH阳性对照、NAD+溶液、Triton X-100 (10%)

特点&优势：

1.分析化合物或环境因素对细胞死亡的作用。

2.LDH从细胞内被释放到培养基中，形成了一个可视化的颜色反应。

3.检测范围：10,00-100,0000个细胞/孔。

文章来源：Abbkine