荷叶生物碱对脂肪变性HepG2细胞脂质积聚的影响

非酒精脂肪肝(Nonalcoholi cfattyliver disease,NAFLD)是一类以肝脏脂肪变性≥5%为特征的常见肝脏代谢综合疾病，在全球范围内的发病率约为25%，造成了严重的医疗和经济负担。流行病学和基础研究表明，调节脂质代谢紊乱对防治NAFLD具有重要意义。目前，具有脂质调节功效的天然产物成分因安全性高、疗效明显的优势已成为研究热点。

荷叶为临床中常用的中草药，已被列入药食同源的名录。现代医学广泛将荷叶应用于干预肥胖症和高脂血症。越来越多研究证明荷叶生物碱是荷叶中发挥调脂功效的主要活性物质，可抑制体外脂肪酶、抑制体外脂肪细胞增殖分化，缓解肝脏损伤和代谢紊乱，改善肝脏脂肪性病变，对NAFLD具有一定的防治作用。但目前荷叶生物碱对NAFLD防治相关研究集中在体内动物模型上，以脂肪酸诱导人肝癌细胞HepG2构建NAFLD体外细胞模型的方法具有造模操作简单和成功率高的优点，可模拟肝细胞脂质积聚，肝脏脂肪变性的特点。在汉斯出版社《食品营养与科学》期刊中，有学者实验通过油酸诱导HepG2建立NAFLD的体外细胞模型，研究荷叶生物碱提取物(LLE)对脂肪变性HepG2脂质积聚的影响并探讨可能机制，以期为荷叶防治NAFLD和相关产品的研发提供一定理论基础。

材料：人肝癌细胞HepG2，购于上海中科院细胞库；荷叶，采自浙江省建德市；RMPI1640培养基，美国Hyclone公司；胰蛋白酶、青霉素–链霉素混合液、RIPA细胞裂解液，Biosharp公司；油酸，分析纯，上海麦克林公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)、饱和油红O染色液，北京索莱宝科技有限公司；血清白蛋白(BSA)，大连美伦生物技术有限公司；非诺贝特(feno fibrate,FF)，浙江大学校医院；TG试剂盒，南京建成生物工程研究所；Trizol试剂、逆转录试剂盒Prime Script TM、实时荧光定量PCR试剂盒TB Green Premix ExTaqTMII，TaKaRa公司；仪器：CKX41GF型倒置显微镜，日本奥林巴斯有限公司；Eon酶标仪，美国伯腾仪器有限公司；25cm2细胞培养瓶、96孔、6孔细胞培养板，美国Thermo Fisher Scientific公司；Thermo ScientificNanodrop2000微量核酸蛋白分析仪，赛默飞世尔科技(中国)有限公司。

采用酸性乙醇超声法制备荷叶生物碱提取物(LLE)：荷叶洗净后在70℃烘干，粉碎后过60目筛，用塑料袋密封包装，置于−20℃保藏备用。称取适量荷叶粉末，用75%酸性乙醇(pH=5)作为浸提溶剂，料液比为1:43，提取温度为63℃，超声提取功率为410W，提取20min，减压抽滤除去滤渣，将滤液旋转蒸发至干后得荷叶醇提物。用1%盐酸水溶液将其溶解，加入1%NaoH溶液调整pH至11，再次减压过率得到滤液，用氯仿反复萃取，将得到的氯仿层旋蒸至干后得LLE。

本研究基于脂肪变性HepG2细胞模型研究荷叶生物碱粗体物(LLE)对非酒精性脂肪肝脂质积聚的影响。LLE对脂肪变性HepG2细胞增殖的影响为低浓度促进，高浓度抑制，IC50为73.77µg/mL。SREBP-1c是肝脏脂质合成的重要调控因子，参与TG的合成酶基因表达的调控，其中ACCα是TG合成的关键限速酶。CPT-1将长链脂酰油酸从胞质中转移到线粒体中，ACOX1主要涉及到脂肪酸的氧化及到ACOX1。PPARα是过氧化物酶体增生物激活受体家族中的一员，可抑制SREBP-1c从而影响FAS和CPT-1的表达，抑制TG的合成并促进脂质β氧化。本实验中LLE可降低脂肪变性HepG2细胞内TG含量和脂滴积聚程度，高浓度效果更为明显，进一步检测脂质代谢相关基因mRNA表达水平发现，LLE对TG合成相关基因SREBP-1c和ACCα的mRNA表达影响不大，但可显著增加TG分解相关基因PPARα、CPT-1和ACOX1的mRNA表达。

综上，荷叶生物碱提取物可抑制脂肪变性HepG2细胞增殖，降低细胞中TG含量和脂滴积聚作用，该作用与TG的β-氧化分解有关。本研究为荷叶生物碱防治NAFLD提供了一定的理论基础，同时对其在食品、保健品及药品的开发应用方面具有参考价值。

文章链接：https://doi.org/10.12677/HJFNS.2021.102010