帕金森病小鼠模型介绍

原型物种：人

来源：MPTP

模式动物品系：SPF级Balb/C小鼠，健康，雄性，4~6W，体重为18g~20g。

实验分组：实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

原理：药物MPTP可破坏小鼠大脑纹状体与黑质间的多巴胺通路来模拟人类的帕金森病。

样本要求：雄性C57小鼠10周龄

检测仪器、耗材、疲劳转棒、爬杆、MPTP（SIGMA）

建模方法：

模型建模方法：

腹腔注射MPTP 20mg／kg／d，连续注射14天。对照组使用等体积生理盐水进行腹腔注射，操作及注意事项相同。MPTP给药结束后，模型建立成功。

药物给以相应的药物处理；正常组、PD模型组使用等体积PBS进行腹腔注射，操作及注意事项相同。

应用：

疾病模型

模型评价：

1.转棒实验：使用小鼠转棒仪检测小鼠的运动协调能力。

将小鼠置于直径为3cm的旋转杆上，转速调整为30r/min，每次同时测定5只小鼠，每个隔室中1只。记录小鼠从转棒开始转动至掉落转棒所经历的时间，测定时间为1min，每次中间休息1min，连续5 次，记录1min 内掉落次数。

2.旷场实验：即自发活动，是检测MPTP损伤后少动的常用指标。

旷场实验所用实验箱为尺寸：500×500×300mm旷场，周壁的颜色为黑色，旷场底面被平均分为16个4×4 个小方格。正上方架摄像头，视野覆盖整个旷场。将动物放置在正中央格，同时进行摄像和计时，时间为5 min。通过计算机示踪分析系统来分析动物在一定时间内的活动状态。实验室保持安静，室温为20 ℃左右，光线充足。观察指标：方格间穿行次数（动物的四肢从一个格进入另一个格为穿行一次）、直立次数（动物双前肢同时离地，或者双前肢放在墙壁上算作直立一次）、中央格停留时间、穿过中央格的次数。

3.爬杆实验：是评价小鼠运动协调能力的经典方法。通过记录小鼠由杆的顶端往下爬到底部（双前爪着地）所需时间，比较其运动能力。本实验将小鼠放置于一个木制的粗糙的小球上，其下端接有一个表面粗糙、截面为圆形的木棒，木棒下端放置于鼠笼里，当小鼠头朝下方从木球爬至木棒上，用秒表记录此刻的时间为 A，当其爬至木棒最下端时，记录此刻的时间为 B，那么小鼠爬完整个木棒所用的时间为 C，C=A-B，每只小鼠测试俩次，将俩次爬杆的平均时间作为统计指标。

组织病理学:

1.脑组织尼氏体染色

取各组小鼠脑组织，经固定液固定、石蜡包埋、切片后，进行尼氏小体染色。观察各组动物脑组织中尼氏小体的数量。

2. 免疫组化检测脑黑质TH表达

取各组小鼠脑组织切片，修片至脑黑质部位，进行免疫组化染色酪氨酸羟化酶的表达。

3.电镜检测脑部线粒体：电镜下观察小鼠脑部多巴胺能神经元细胞超微结构。低倍视野有基本完整的细胞结构，高倍视野中要有线粒体线粒体特写， MPP组可见铁死亡线粒体：大小变小，双层膜密度增高，外膜断裂，脊减少或消失。