风湿/类风湿类疾病动物模型造模方法

类风湿性关节炎（RA）的病因与病理一直是医药工作者研究的热点，建立起理想的动物模型是十分必要的。近年来报道较多的是Ⅱ型胶原(CⅡ)和不完全弗氏佐剂(IFA)混合注射所致的关节炎模型(CIA)及弗氏完全佐剂诱导的佐剂动物关节炎模型。胶原关节炎模型比佐剂关节炎模型更接近人类RA的病理特征。为了更有效地观察到关节骨破坏模型，对传统的方法进行改良后得到大鼠类风湿颞下颌关节炎动物模型。1 材料实验动物：Wistar大鼠48只，雌性，5周龄，体重约（120±15）g，   牛源性Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ)，弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund’s Adjuvant, IFA)，美国Sigma公司产品。2 方法诱导产生大鼠类风湿颞下颌关节炎模型：剃除大鼠背部周围毛，取配置好的乳剂100μl，自鼠尾部开始,在脊柱两旁皮下多点注射，每只鼠注射1.0ml，1周后加强免疫1次,注射0.5ml/只。建立胶原诱导的大鼠实验性关节炎动物模型。对照组用生理盐水同期注射。服务说明：动物模型实验涉及的试剂可由客户提供，也可查看公司的产品库，亦可由我们代购。模型名称建模方法模式动物品系类风湿关节炎(RA)小鼠模型胶原诱导的关节炎Babl/c小鼠，SPF级，健康，雄性，体重：18g-22g类风湿关节炎(RA)大鼠模型胶原诱导的关节炎Wistar大鼠，SPF级，雄性，体重：180g~220g类风湿关节炎(RA)兔模型胶原诱导的关节炎大耳白兔， 健康， 雌雄不限， 体重为1.5-2.5kg。佐剂诱导的关节炎模式动物品系： Babl/c小鼠，SPF级，健康，雄性，体重：18g-22g实验分组： 随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组 (多个浓度梯度组)，15只每组实验周期： 4 weeks建模方法： 抓取小鼠，于右后足皮内注射 0.1 mL CFA 致炎，从而建立小鼠佐剂性关节炎模型；对照组于右后足趾皮下注射0.01moL/L 冰醋酸 0. 1mL，以排除 CFA 中溶剂的致敏效应。应用 用于研究类风湿关节炎（ RA）的发病机制，并提供一个理想的药物疗效的实验模型模型评价1.体质重测定：分别于0d、7d、14d、21d、28d记录小鼠的体重，比较模型组小鼠体重和对照组小鼠的体重变化；2.免疫评价：称量小鼠体重，处死小鼠，取出脾和胸腺，生理盐水漂洗后用纱布吸干表面水分，分别于电子天平上称质量(湿质量)，并计算脏器指数。脏器指数 = 器官湿质量(mg) /小鼠体重(g)3.足跖肿胀值（mm）测定：足趾肿胀度是佐剂性关节炎测量的一个重要指标。0d时在小鼠足跖同一地方做标记，用电子游标卡尺以标记为准，测定小鼠足跖厚度，以后每隔7d(7、14、21d和28d时)再分别测量，进行自身左右侧足跖对照和组别间对照。4.关节炎指数(arthritisindex index，AI)评价：采用关节炎指数 积分评价其关节炎症程度。除了诱导部位右后足以外，根据其余3只未注射的肢体病变程度和趾间是否发炎对每一足爪分别进行打分，以0～4分记录，累积得分即为每只小鼠的关节炎指数。0分：无红斑和肿胀的证据；1分：红斑和轻度肿胀局限于足中段或踝关节；2分：红斑和轻度肿胀从踝关节蔓延至足中段；3分：红斑和轻度肿胀从踝关节蔓延至关节；4分：红斑和重度肿胀包括了踝、足和趾；组织病理学处死小鼠，留取剔除软组织的后肢踝关节，固定、脱钙、包埋、石蜡切片后行HE染色作组织学观察。正常小鼠踝关节结构正常，无炎性细胞浸润，滑膜细胞排列整齐，软骨表面光滑，关节腔内未见渗出液；模型组小鼠关节破坏明显，周围大量中性粒细胞浸润，滑膜增生肥厚，纤维组织增生，软骨及骨骼损伤。标志因子水平小鼠3%戊巴比妥钠麻醉后，摘取眼球取血，静止30min，4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。使用ELISA试剂盒检测TNFα、IL-1β等细胞因子。