β-地中海贫血的胚胎植入前遗传学诊断与分析

胚胎植入前遗传学诊断技术（pre-implantation genetic diagnosis, PGD）是以体外受精-胚胎移植技术为基础，结合显微操作技术和单细胞DNA分子分子检测技术发展起来的新技术，它避免了被动妊娠遗传病患儿给夫妇带来的痛苦，使人类有可能主动地控制自身的生殖活动，生育健康的后代。

一、临床表现与诊断要点

地中海贫血是一类以珠蛋白α链和β链合成量不足或缺失，引起红细胞寿命缩短的一种溶血性贫血。目前是全球最常见的单基因遗传性疾病之一，也是一组严重威胁人类健康的血液病，我国南方大部分地区是地中海贫血的高发区。重型β-地中海贫血患者发育迟缓、生命质量差，需长期输血，给家庭和社会带来沉重的压力。现阶段临床没有很好的治疗地中海贫血的方法，对孕妇群体进行及时准确的基因学诊断、防止重型地中海贫血患儿出生，是当前国际社会控制地中海贫血相对有效的措施，但患者要面临流产或引产等痛苦。按临床症状可以分为静止型、轻型、中间型以及重型地贫。静止型和轻型一般不影响生活质量。后面两种需要治疗。

β-地中海贫血的临床表现特征为：血红蛋白β亚基的合成减少，导致小细胞低色素性贫血，外周血涂片会显示有核红细胞的异常现象，且血红蛋白分析显示血红蛋白A(HbA)数量减少。重型地中海贫血的患者会出现严重的贫血症和肝脾肿大；往往在出生在后2周岁内发病，发病时间越早，病情越重。

手部X线显示掌骨、指骨、桡骨下端及尺骨小梁粗化，呈镶嵌状

为典型的髓外红细胞生成。

中间：地中海贫血血红细胞呈小细胞低色素性贫血；

右侧：地中海贫血血红细胞大小不一

重型β地中海贫血的典型临床表现包括重度贫血、 面色苍白、 特殊面容、 肝脾肿大、 反复依赖输血等。然而，近年来，重型β地中海贫血患者经过规律的输血和袪铁治疗， 临床症状已得到明显改善， 体征可不典型甚至近于正常。实验室检查提示的小细胞低色素性贫血， 应注意排除缺铁性贫血。血红蛋白（Hb）电泳是诊断地中海贫血的重要方法， HbF显著增高， 一般达30%～90%。骨髓象呈红细胞系统增生明显活跃，以中、晚幼红细胞占多数。尽管骨髓细胞学检查并非诊断重型β地中海贫血的主要条件， 但有助于排除白血病、 单纯红细胞性再生障碍性贫血等疾病。另外有关实验室检查应注意排除近期输血影响， 必要时应于输血后3个月左右复查。

地中海型贫血的检查项目及顺序应为：1. 血液常规检查 (blood routine) ，可以对贫血类型有个初步判断 ；2. 铁蛋白检查 (ferritin)  3. 血红蛋白电泳 (Hb-Ep)  4. 海洋性贫血基因检查 (α & β thalassemia PCR)，上述四种检查应依照排列顺序进行。

二、地中海贫血的遗传咨询

β-地中海贫血的发现机制主要是由于位于11p15.3上的HBB基因发生先天性突变，目前全球已发现300多种β-地中海贫血突变，且以点突变为主，基因大片段缺失为次。根据新的命名规范，《2017指南》指出，中国人有以下6种热点突变：c.126_129delCTTT、c.315+654C＞T、c.52A＞T、-28A＞G、c.217dupA和c.79G＞A。

目前国内实验室多应用反向点杂交方法进行地中海贫血的基因诊断，但该方法主要针对我国常见的珠蛋白基因突变类型进行检测。因此，临床诊断成立的重型β地中海贫血，且基因不是已知突变点者，应在明确家族调查资料证实父母均为轻型β地中海贫血的背景下，开展基因测序。基因诊断同时又是“逆向诊断”。理论上，重型β地中海贫血应该均为“纯合子”或“复合杂合子”。但基因为“复合杂合子”者临床不一定都是重型， 对基因结果的分析应紧密结合临床； 而且， 应以临床为主导。导致基因与临床不符的原因如下：（1）Hb的α链和β链的相对平衡，如重型β地中海贫血者同时又患α地中海贫血，可以减轻贫血的严重程度。（2）11号染色体的某一单体连续出现两个突变点，同源的另一单体正常，临床上呈轻度贫血。（3）持续性胎儿Hb增高症（HPFH）。

轻型地贫携带者同正常人婚配，其后代有 50%的机会成为轻型地贫携带者。静止型地贫与轻型地贫婚配，有 1 /4机会生出地中海贫血患儿。如果如果夫妻为同型地贫基因携带者，每次怀孕，胎儿有1/4的机会为正常，1/2的机会为基因携带者，另1/4的机会为重型地中海型贫血患者。而如果夫妻双方携带的是不同型的地贫基因，或者只有一方携带地贫基因，所生的孩子不会得地贫。因此双方地中海贫血携带者要引起重视。如果夫妻双方者是地中海贫血的携带者，将有可能导致重型地贫患儿的出生。

地中海贫血遗传模式图

鉴于本病缺少根治的方法，临床中、重型预后不良，故在婚配方面医生应向有阳性家族史或患者提出医学建议，进行婚前检查（孕前检查）和胎儿产前基因诊断，避免下一代患儿的发生，那么对于地中海贫血要如何应对呢，那就是对于下列家庭需要进行遗传咨询：1、有过中、重型地贫患儿生育史的夫妇；2、同型地贫携带者的夫妇；3、αβ复合型地贫携带者的夫妇；4、αβ复合型与其中一型地贫携带者的夫妇。

当父母基因型确定后，可通过早期胚胎取样，用聚合酶链反应技术对可疑地中海贫血胚胎细胞进行胚胎植入前遗传学诊断，在妊娠前即可选择健康（非地中海贫血胚胎）的胎儿。早期胚胎细胞，用聚合酶链反应（PCR）技术对可疑地中海贫血胚胎细胞进行胚胎植入前遗传学诊断，在妊娠前即可选择健康（非地中海贫血胚胎）的胎儿