细胞传代培养的原理

1、悬浮细胞传代

待培养液中酚红指示剂变黄，在已紫外灭菌后的超净台上吸出或倒出细胞悬液至离心管中（根据细胞液的量选择15ml或50ml离心管），800-1000rpm下离心5min，弃去营养匮乏的旧培养液，加预热好的完全培养液适量，轻轻吹打重悬细胞后，吸取适量细胞悬液转移至细胞培养瓶中，或直接取适量细胞悬液至新培养瓶中，再补加一定量新鲜完全培养液进行传代，有些脆弱的细胞用自然沉降法沉降细胞，吸去上面旧培养液加入新的完全培养液后吹散进行传代。传代接种的细胞密度根据不同细胞生长情况而定，一般间隔1-2天即可传代一次。

2、贴壁细胞传代

待培养瓶底中细胞覆盖率达70%-80%时，在经紫外灭菌后的超净台上，弃去旧细胞培养液，用无菌1*PBS洗涤瓶底细胞1-2次，用1ml（T25培养瓶）或2ml（T75培养瓶）trypsin溶液37℃下作用细胞，待显微镜下细胞回缩变圆，少部分细胞出现流沙状时，快速吸去trypsin溶液，加预热好的新鲜完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落且分散均匀，直接吸取适量细胞悬液转移至新培养瓶中，或800-1000rpm下离心去上清，加适量新鲜完全培养液吹打重悬细胞，然后转移适量细胞悬液至新培养瓶中，再加入一定量完全培养液，摇匀瓶底细胞液后进行培养。