FLEX条件性表达慢病毒载体（Cre-Switch）是什么？

FLEX Cre-switch系统由两对异型Lox-变体重组位点组成，其中野生型序列称为LoxP，突变体称为Lox2272，分别位于两个基因ORF的两侧。 两个ORF相互反向，其中一个ORF具有正确的读码方向（相对于启动子）。两种Lox-变体都可被Cre识别，但只有相同的Lox位点对可以彼此重组，与其他Lox-变体不能进行重组。LoxP和Lox2272位点以交替方式位于两个ORF两端，每对位点互为反向。Cre重组酶不存在的情况时，第一个ORF由于其编码方向与启动子方向相同，可以在客户定制的启动子驱动下正常表达，而第二个ORF由于其方向相反则无法正常表达。在Cre的存在下，LoxP和Lox2272位点对分别重组，导致两个ORF方向反转，且其中的一对重组位点将具有相同的方向，Cre会介导产生正向重组切割，继而分别留下一个不同的重组位点。 ORF方向的反转，使得第二个OR可以在启动子的驱动下正常表达，而第一个ORF将不表达。 由于ORF侧翼是两个不同的Lox-变体位点，所以即使存在Cre也不会进一步发生重组。

慢病毒载体首先以质粒的方式构建并使用E. coli扩增，然后与多个辅助质粒一同转染至包装细胞。载体上的两个LTR区域之间的DNA序列将被转录成RNA，而辅助质粒表达的病毒蛋白进一步与这些RNA组装形成完整的病毒颗粒。有活性的病毒颗粒被释放到上清液中。病毒上清液可直接转染或者浓缩后转染细胞。

当慢病毒感染靶细胞时，病毒RNA被反转录成DNA，然后永久性整合到宿主基因组。位于两个LTR区域之间的载体组分永久整合到宿主基因组。对于上述的FLEX介导的Cre-Switch条件性表达慢病毒载体，FLEX Cre-Switch调控的两个反向平行的ORF位于两个LTR之间的区域。这两个ORF也被永久整合到宿主基因组当中，并在Cre调控下使得其中一个ORF获得激活表达，另一个则表达失活。