腺相关病毒安全使用和注意事项

一、  腺相关病毒安全使用注意事项

1)   腺病毒相关实验请在生物安全柜（BL-2级别）内操作。

2)   操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。

3)   操作病毒时需要特别小心病毒溅出。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用 70%乙醇加 1%的SDS溶液擦拭干净。

4)   接触过病毒的枪头、离心管、培养板及培养瓶请用84消毒液浸泡后统一处理。

5)   如实验过程中需要离心，应使用密封性好的离心管，必要时请用封口膜封口后离心。

6)   病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌后处理。

7)   实验完毕后请用香皂清洗双手。

二、  腺病毒储存与稀释的注意事项

1）腺病毒的储存

收到病毒液后若在短期内使用，可将病毒放置于 4℃ 保存（一周内使用完最佳）；如需长期保存请分装后放置于 -80 ℃ 。

注：

a.反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融会使病毒滴度降低10%~50%），因此在病毒使用过程中尽量避免反复冻融。对病毒已进行分装（200 μl/tube），收到后请直接放置-80℃冰箱保存即可。

b.若病毒储存时间超过6个月，建议在使用前重新测定病毒滴度（参见附表2-慢病毒滴度测定方法）。

2）腺病毒的稀释

需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用PBS或培养目的细胞用的无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后置于 4℃保存(一周内使用完最佳)。

重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。重组腺病毒具有以下几个显著优点：感染范围广，几乎可以感染所有的细胞系、原代细胞和部分组织；感染效率高达 100%，可全面超越其他病毒载体工具和脂质体转染；对外源基因容载能力大（可以高达 8Kb）；不整合基因组；滴度高，操作方便。因此，重组腺病毒是一种最具有潜力的基因递送工具。

目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36Kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。

目前最常用的腺病毒包装体系有AdEasy和AdMAX两种，其共同特点是目的基因首先克隆到穿梭载体，然后再重组到腺病毒的大骨架上。这两个系统均具有腺病毒早期转录复制基因E1和E3的缺陷(ΔE1,ΔE3)，其中E3基因对病毒产生并非必需。因此，腺病毒包装必需依赖表达E1的细胞系，例如HEK-293，HEK-293A等。

相对于Adeasy系统，AdMAX系统操作便利，并且可以获得更好的病毒滴度。本操作说明均基于AdMAX系统，该系统由pHBAd系列穿梭质粒、腺病毒骨架载体pBHGlox(delta)E1, 3Cre双载体组成。