如何解决细胞支原体污染的问题?

　　培养细胞时尽量避免细胞污染

　　细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。造成的原因有：无菌操作技术不当、操作室环境不佳、导致污染血清和污染细胞。首先要严格无菌操作、保持环境清洁、质量好的细胞和培养基配制也是减低污染风险的最好方法。

　　细胞发生污染时的处理办法

　　原则上：直接灭菌后扔掉。

　　当重要的细胞污染时，我们都会试着去消除或控制污染。首先，确定污染物的种类，然后，把它与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。

　　高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，需要做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。

　　消除和减少污染细胞的实验步骤。

　　1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。

　　2.分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。

　　3.每天观测细胞毒性指标，是否出现脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。如没有上述的现象，可以进行第4步操作。

　　4.使用低于毒性浓度2～3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2～3代之后在无抗生素的培养基中培养一代。 。

　　5.重复步骤4。

　　6.在无抗生素的培养基中培养4～6代，确定污染是否以已被消除。

　　21.支原体(mycoplasma) 污染的细胞对实验的影响

　　大多数遭受支原体污染的细胞株， 无法肉眼看见，除少数有经验的老师之外，但是支原体污染的细胞随着传代次数的增加，感染支原体的细胞状态会越来越差。支原体污染几乎可影响所有细胞的生长参数、代谢及研究的参数。所以进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free。

　　一旦细胞感染上支原体的时候，可以尝试使用支原体抑制剂杀除（中乔新舟  货号：ZQ506）；若实在不能根除，考虑引进新的种子培养。

　　24. CO2 培养箱清洁方法

　　定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。