组培大讲堂之专利技术分享——金钗石斛

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技术背景

金钗石斛(Dendrobium nobile Lind)为兰科石斛属多年生附生草本植物，含有石斛碱、石斛多糖、多酚类、菲类和联苄类等多种药效成分，具有抑制肿瘤、抗衰老、提高人体免疫力、补五脏虚劳等功效，是我国传统的名贵中药。

目前，石斛育苗主要通过植物组织培养获取，虽然现有组织培养技术已经不断改进，并已形成了以种子为外植体的三步成苗的技术即种子萌发培养2～3个月后转接到增殖壮苗培养基中，培养3～4个月后再转接到生根培养基中培养2～3个月，但是三步成苗法依旧繁琐，需要多次换瓶转接，不仅浪费人力、财力、物力，而且增加了组培苗的污染率，从而导致组培苗数量减少，试管苗损失。

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具体实施方式

1、果荚选择

选取果实饱满，无病虫害，无破裂的蒴果，取材时间在晴天中午最佳。

2、金钗石斛蒴果消毒

取金钗石斛成熟蒴果，在流水下冲洗65min，用洗衣粉液浸泡23min，继续用流水冲洗干净，在超净工作台上用75%乙醇消毒30s，无菌水冲洗三次，再用0.1%的升汞消毒8min后，用无菌水冲洗5～6次，滤纸吸干外表水分。

3、准备培养基

一步成苗培养基的配制，向600 mL的自来水中加入2.47g的N6基本培养基、加入1.0 mg/L6-BA，0.3 mg/L2,4-D，加入打碎的土豆汁45g，香蕉汁145g、蔗糖25g，用水将体积添加到1000 mL，调节pH为5.7，最后加入6.5g琼脂，120℃高温灭菌20min。

4、无菌点播

将经过消毒处理的金钗石斛蒴果放入无菌盘上用刀片将其剥开，将种子洒到无菌水中，拿无菌枪头吸取300μL滴到载播片上，拿到显微镜下观察种子数量，重复三次，取平均值，得到种子悬浮液的浓度为90个/mL。然后把种子悬浮液的瓶子摇晃一下，迅速用无菌枪头将种子悬浮液接种到一步成苗培养基上，种子悬浮液的接种量为330 μL/组培瓶，接种1000瓶。

5、种子萌发

用报纸或锡箔纸包装组培瓶，无光照，温度24℃，湿度80%条件下进行暗培养。暗培养30天后，将金钗石斛幼苗放置到组培室进行光照培养，光照培养的条件为：温度24℃，湿度80%，光照15 h/d，光照强度2300Lx。7个月以后长成7～9cm的带有根茎叶的健壮小苗。

6、移栽

移栽过程如下：在一天中最接近25℃的时候，将组培苗移至中药石斛栽培资源圃中，不开瓶盖，放置一周，使其适应外界自然环境的温度。之后再将瓶盖拧开，将组培苗在大棚放置4～5d，使其适应自然环境中的湿度。随后用镊子将组培苗从瓶中取出，清洗组培苗根上附着的培养基，直至全部培养基被洗掉没有残留为止。为防止杂菌感染，洗净后的组培苗用多菌灵1000倍稀释液液浸泡金钗石斛幼苗10min杀菌，然后取出放置于阴凉处的网格架上晾晒，晾晒标志为金钗石斛组培苗的根部微微发白，也就是洗出第2天即可直接用于移栽定植。移栽将松树皮与锯木屑用沸水煮2h进行杀菌消毒处理后，再将基质浸泡至800～1000倍的多菌灵水溶液里，待多菌灵水溶液完全渗透进基质后捞出、放至有格子的盘子中，将多余的水分除去，标准为湿润不滴水滴为宜，备用。移栽容器采用40cm×60cm×8cm的平盘，选择长势均一的金钗石斛组培苗，以5株为一丛，每个试验组重复3次。

7、移栽后管理

组培苗移栽后每天应喷雾1～2次，适时地透水使基质保持湿润，移栽1周以后，每天浇水1次，同时每周喷施1次0.1%花宝2号叶面肥。另外第一周金钗石斛移栽苗进行适度遮荫处理，温度控制在10～25℃以内，以保证其正常生长。

写稿人：石碧滢

编辑：钱楚怡