值得收藏！—超级常用分子生物学试剂配制方法倾囊相授！

分子生物学试验所用水都是去离子水ddH2O双蒸水级别的，所以器皿都要用去离子水冲洗两三遍；配制好试剂的贴标签标注，包括试剂名称、配制日期、配制人；加热和搅拌可以促溶解。1电泳类

DNA电泳试剂成分及终浓度配制100mL溶液用量2mol/L Tris1mol/L 乙酸100 mmol/LEDTAddH2O24.2g5.71mL的冰乙酸（17.4 mol/L）3.72gNa2EDTA·2H2O补足100mL50×Tris-乙酸（TAE，pH=8.5）缓冲液注意事项1. 准确称量各物质，确保缓冲液处于最佳状态。2. 不要用Tris缓冲液来配制2mol/L Tris，因为常见的Tris缓冲液用了HCl调节pH，成了Tris-HCl缓冲液，使用纯Tris，配制Tris-乙酸缓冲液。蛋白SDS－PAGE电泳试剂10×Tris-甘氨酸缓冲液成分                 配制100mL溶液用量1 LTris                  30.2 g甘氨酸             188 gSDS                 10g使用时稀释10倍使用

Western Blotting10×转膜缓冲液（10×running buffer） (定容至1L)Tris            30.3g甘氨酸       144g不调pH使用时稀释10倍使用1×转膜工作液 (定容至1L，4℃保存)（现配现用）10×转膜缓冲液                       100ml无水甲醇                                 200mlddH2O                                   700ml10×TBS 缓冲液（1L）Tris-HCl      24.3gNaCl            88g用浓盐酸约14ml调节pH值至约7.4（pH试纸检测即可）1×TBSTTBS+Tween-20 0.1%（1ml for 1L）2培养基类

LB培养基将下列组分溶解在0.9L ddH2O中：蛋白胨Tryptone10g酵母提取物Yeast Extract5g氯化钠Nacl10g2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L ddH2O中：蛋白胨Tryptone16g酵母提取物Yeast Extract10g氯化钠Nacl5g注意事项如需用4M NaOH（约0.5mL）调整pH至7.0，再补足水至1L。分装于锥形瓶并用封口膜进行封口，121℃灭菌20min，4℃保存。

细菌LB固体培养基在LB液体培养基的基础上，加入1.5g/100ml琼脂粉Agar， 121℃灭菌20min，降温到60℃，稍微烫手，加入抗生素迅速倒平板，每个10cm平板大约倒10ml，4℃保存三个月。3抗生素类氨苄青霉素（Amp）（100mg/mL）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的ddH2O中，定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以常50ug/mL终浓度添加于生长培养基。卡那霉素（kan）（10mg/mL）溶解100mg卡那霉素于足量的ddH2O中，定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以50ug/mL终浓度添加于生长培养基。注意事项1.以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，用ddH2O配的用0.45或0.22um无菌过滤器过滤除菌。2.所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存，也可用锡箔纸包裹。3.抗生素配制出以后4℃可保存3个月，-20℃可保存一年。4核酸蛋白提取类

RIPA裂解液成分及终浓度                       配制500mL溶液用量50mM Tris（PH7.5）           3.02g150mM NaCl                       4.38g1%TritonX-100                    5ml1%脱氧胆酸钠                      5g0.1%SDS                              0.5gddH2O至 500ml，调pH值至7.5。混匀后4℃保存，长期保存于-20℃。使用时，加入蛋白酶抑制剂cooktail。5M NaCl称取29.22g氯化钠于100mL烧杯中，加入约80mL ddH2O加热搅拌溶解，定容至100mL，高温高压灭菌后使用，4℃保存。0.5M EDTA(pH8.0)溶液在80mL ddH2O中加入18.612g EDTA-Na2·2H2O，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需2.2g NaOH颗粒）然后定容至100mL，分装后高温高压灭菌备用。室温长期保存。注意事项EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。而且配制时最好使用EDTA钠盐（其较易溶于水，而EDTA较难溶于水，易溶于有机溶剂）。10mg/ml牛血清蛋白(BSA)加100mg BSA于9.5ml ddH2O中，定容到10ml，分装贮存于-20℃。1M二硫苏糖醇（DTT）在DTT 5g的原装瓶中加32.4ml ddH2O，分成贮存于-20℃。1M HEPES将23.8gHEPES溶于约90ml的ddH2O中，用NaOH调pH（6.8-8.2），定容至100ml。1M HCl加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的ddH2O中。25mg/ml IPTG溶解250mg的IPTG于10ml ddH2O中，分装贮存于-20℃。1M MgCl2溶解20.3g MgCl2·6H2O于ddH2O中，定容到100ml。100mM PMSF溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml，分装避光贮存于-20℃。

注意事项1.PMSF剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康，穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。2. PMSF在水溶液中不稳定。1％溴酚蓝（bromophenol blue）加1g溴酚蓝于100ml ddH2O中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。4X上样缓冲液成分及终浓度                        配制10mL溶液用量1.0 mol/L Tris·HCl（pH6.8）       2ml2%SDS                                         0.8g0.1%溴酚蓝                                  0.04g10%甘油                                      4mlddH2O定容至10ml。混匀分装4℃保存。使用时稀释成1X，加入1M DTT（10X），例如：上样量20μl--4X上样缓冲液 5μl+ DTT 2μl + 样本蛋白13μl。SDS是保证样品中的所有蛋白带电荷一致，减少电荷对电泳结果的影响。还原剂是让二硫键处于断开状态，保证蛋白分子的线性。溴酚蓝作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是使蛋白变性的永久保存。

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