组织学技术 地衣红染色

地衣红染色（弹性纤维染色）

地衣红染色法

⑴组织用10%甲醛(Formaldehyde)液、甲醛酒精液（Formaldehyde-Alcohol,FA）或Helly液固定。

⑵常规脱水，石蜡包埋切片。

⑶切片用二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至水。含汞固定者至70%酒精加少量碘酒去汞。

⑷入地衣红液37℃染15~30分钟，室温染1~2小时。

地衣红液：地衣红（Orcein）1克，浓盐酸（Hydrochloric acid）1毫升，70%或80%酒精(Alcohol)100毫升，放数小时后使用。

⑸用70%酒精洗涤，水洗后入蒸馏水洗1分钟。

⑹常规苏木精(Hematoxylin)染核，也可加伊红(Eosin)复染。

⑺经各级酒精脱水、二甲苯透明、树胶封片。

结果：弹性纤维呈深棕色，细胞核蓝色，结缔组织红色。

*地衣红染色后，不能在70%酒精内滞留太久，否则易褪色。此法染疏松结缔组织铺片及肠系膜铺片中的弹性纤维较方便且效果好。

Humason-Lushbaugh镀银法

方法：

⑴新鲜组织用10%甲醛液、甲醛酒精醋酸液(FAA)或 Zenker液固定，常规脱水，石蜡包埋切片，或不脱水做冰冻切片。

⑵切片用二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水。

⑶入5~10%吡啶(Pyridine)水溶液10~15分钟。

⑷95%酒精 处理1~2分钟，70%酒精1~2分钟 ，蒸馏水洗1分钟。

⑸入0.5%高碘酸(Periodic acid)水溶液5~10分钟，蒸馏水洗速洗两次。

⑹入碳酸氨银液37℃温箱30~120分钟，稀氨水（蒸馏水100毫升加浓氨水1滴）数秒，蒸馏水洗速洗数秒。

⑺入新配的5~10%甲醛液还原2~5分钟，蒸馏水洗两次。

⑻入0.2%氯化金(Gold trichloride)水溶液调色30~60秒，蒸馏水洗。

⑼入5%硫代硫酸钠(sodium hyposulfite)水溶液3分钟，流水洗。

⑽70%酒精1分钟。

⑾入地衣红液37℃染弹性纤维15~30分钟，待切片冷后，蒸馏水洗速洗。

地衣红液：地衣红（Orcein）0.5克，盐酸0.5毫升，70%酒精100毫升

⑿入2%磷钼酸(Phosphomolybdic acid)水溶液处理3~5分钟，蒸馏水洗略洗。

⒀入苯胺蓝混合液染胶原纤维约5~10分钟，水洗。

苯胺蓝液：苯胺蓝(Ainlin blue water solution)0.2克，草酸(Oxalic acid)0.5克，磷钼酸2克，蒸馏水100毫升，混合溶解后使用。

⒁入0.5%醋酸(Acetic acid)水溶液1~2分钟，水洗。

⒂95%酒精 及无水酒精(absolute alcohol)分色脱水各1~2分钟，用吸水纸吸干。

⒃二甲苯透明，中性树胶封片。

结果：网状纤维黑色；弹性纤维红褐色；胶原纤维蓝色。

三种纤维联合染色，效果好。如将地衣红改为Weigert品红间苯二酚（雷琐辛）液，弹性纤维效果一样。苯胺蓝液可用Mallory苯胺蓝-橘黄G液代替显示胶原纤维，还能显示血细胞。

肠系膜台盼蓝注射HE染色法

⑴大小鼠皮下或腹腔注射0.2~0.5%台盼蓝（Trypan blue)水溶液或生理盐水溶液，每公斤体重每次2~3毫升，每天1次，连续3~6天后取材。（大白鼠体重250~300克）

⑵断头放血，取肠系膜平铺于载玻片或云母片上。

⑶固定：

Helly液30~60分钟，流水冲洗1小时，碘酒脱汞，硫代硫酸钠去碘；

酒精甲醛醋酸液（AFA）30~60分钟，水洗两次。

（固定和水洗时间不能太久，否则台盼蓝颜色会褪色）

⑷1%地衣红液37℃温箱15~30分钟染弹性纤维，流水洗，蒸馏水洗。

⑸Ehrlich苏木精(Hematoxylin)、伊红(Eosin)复染。

⑹95%酒精分色两次各2分钟，无水酒精 脱水两次各2分钟，用吸水纸或滤纸吸干。

⑺二甲苯透明，中性树胶封片。

结果：细胞核蓝紫色；细胞质红色；巨噬细胞胞质内有蓝色的颗粒；成纤维细胞淡灰蓝色，有少量蓝色吞噬细胞；弹性纤维棕褐色；胶原纤维红色。