血清的使用方法及注意事项

血清是细胞培养中唯一外源添加的成分不确定的物质，血清的质量对实验成败起着关键性作用，但血清使用不当也可能会导致血清质量下降，造成细胞培养效果不理想。今天小编请来OriCell®专家来给大家聊聊血清使用中的一些疑惑，帮助大家理清头绪，实验开展顺顺利利。

怎样确定血清使用浓度？

这个只能通过测试了。原则上血清添加量不要太多，通常分为5%、10%、20%几档。部分细胞原代提取时会使用20%血清，大部分细胞正常培养时会使用5%～10%的血清浓度。至于某一株细胞适应什么样的血清浓度，还需要根据细胞特性、实验目的做测试和调校。

血清使用前需要离心吗？

这个问题我理解为两种可能。

其一，因为血清融解后有“絮状物”析出。如果没有出现其他异常情况，或者血清只是用于细胞培养，那么完全没有必要离心去除。我们知道血清析出的“絮状物”主要是血纤蛋白，其在血清中含量很高，而且高度不溶，在血清冻融过程中极易析出，但它也是完全无害的，甚至能促进细胞生长。另外，它还增强了血清黏性，为细胞提供了额外的机械缓冲。在其析出过程中，会粘附培养体系中其他成分，离心去除，反而会损失营养成分。

其二，实验要求纯净的培养体系。培养的细胞需要进一步鉴定，如免疫荧光、流式、共聚焦拍照等，细胞表面如果有黏性较强的血纤蛋白，势必会影响效果。那么，建议400g离心5min即可。如果需要进行精密实验，如分离外泌体等，那么就需要至少100000g离心1.5h以上

血清灭活和不灭活有什么不一样？

在回答这个问题之前，我们先要弄清楚灭活究竟灭的是什么成分的活性。其实56℃、30min的处理只能去除补体和部分其他蛋白的活性。补体是免疫系统的一部分，在体内可通过多条途径被激活，从而发挥调理吞噬、裂解细胞、介导炎症、免疫调节和清除免疫复合物等多种作用。血清灭活的说法最早是在细胞培养技术发展初期，大部分实验室还在使用小牛血清甚至成体动物血清，或者以前培养某些人源细胞时会添加人血清。因为血清供体已与环境长期接触，体内免疫系统已经经历了一场又一场的战斗，而保留了“丰厚的战利品”——抗体、补体等，这些成分在体内可以由免疫系统清除，但在体外的细胞培养中，可能会对部分细胞产生损伤。巧在人们发现这些成分不耐受高温，所以才有了热灭活处理。

细胞培养技术发展到今天，我们已经能把控原材料的质量。对于血清，我们会选择胎牛来源。因为在体内有胎盘屏障的隔离，又尚未接触体外环境，其自身免疫系统、免疫物质几乎为零。这个时候，如果不是对血清成分的极度苛刻，再谈灭活就有些多余了。甚至因为热处理，导致血清内大量蛋白析出，同时粘附其他成分一起丢失，对细胞培养而言就得不偿失了。

怎样为您的细胞选择合适的血清？

目前市面上的血清产品五花八门，各种品牌宣称来自各个血源地，让人眼花缭乱。可以确定的是，除了所谓的“水货”，它们当中绝大多数都是质量合格的产品。但合格不一定好用，或者说适用于某一种细胞。要确定一款血清的性能，或者从众多血清来源中挑选一款，唯一的办法就是筛选验证。

血清的筛选验证主要包括：形态验证、增殖能力测试和克隆形成能力测试。我们通过多次传代，分辨同细胞、同代次、不同血清样品培养的细胞形态间的细微差异；或者同血清样品、不同细胞、不同代次间，细胞形态维持的情况。我们通过同一细胞多次传代，每代接种相同细胞量，间隔相同时间后计数得到单位时间倍增数，确定增殖性能。又通过不同细胞在相同培养面积内接种相同的少量的细胞，根据形成的单克隆数量、大小，判断血清支持克隆形成的能力。

一款血清需要综合达到这几个性能的高水平表现，才能称为好血清。或者一款血清在培养某种细胞时，这几个方面的表现都优秀，才是最适用的。