产品|-必须掌握的标本采集流程(IVD分子类)
分子诊断检测的标本采集总原则包括两点:标本不被外界因素污染,操作者不被标本中潜在的病原体感染。
采样要求:采集者在采集标本的过程中必须戴手套、帽子和口罩,无菌体液标本采集时应遵循无菌操作规则,即可防止采集过程中对样本的污染,也可避免采集者受到感染。
血液样本
血液标本是临床分子诊断最常用的原始样品,应用最为广泛,几乎可以用于所有类型的基因检测,涉及遗传病、感染性疾病、肿瘤等。
分子诊断中血液样品以静脉血最为常见,检测时根据不同检测目的可采用全血、血浆或血清,血液标本的标准采集流程如下:
组织标本
组织标本主要是血液标本和口颊标本无法获取,或者组织标本的基因型与血液标本或口颊标本不一致(如实体肿瘤或镶嵌现象时),或者组织是某些感染性病原体的唯一宿主时需要应用。
临床分子诊断中常用的组织标本包括新鲜组织样本(图1)和石蜡组织样本(图2),首选新鲜组织标本,石蜡组织标本是在新鲜标本无法获取时的替代选择。
图1
图2
产前诊断标本
产前诊断标本包括绒毛膜、绒毛膜培养细胞、羊水、羊水培养细胞及其他所有胎儿分娩前获取的细胞样本。
必要时采集标本进行检测,可以在分娩前预测胎儿的基因型和表型信息。
产前诊断标本的标记信息应至少包括母亲的全名和标本类型,同时应采集母亲的外周血以排除母体细胞和核酸的污染
在检测完成之后,原始标本需备份保存,且必须保留备份培养物,羊水穿刺必须在胎儿15周以后才能进行,最小标本采集量应不小于10ml.
一般由临床医师以无菌操作进行羊膜腔穿刺采集,医师在超声探头的引导下,用一根细长穿刺针穿过腹壁、子宫肌层及羊膜进入羊膜腔采集标本,标本采集后应尽快送检。
绒毛膜标本在运送之前必须洗净以排除母体细胞的污染,尤其是母体子宫内膜脱落组织。
绒毛膜标本标准采集量为15mg,应储存在惰性培养基或者生理盐水中进行运送绒毛膜或羊水培养细胞应同时双瓶细胞培养,且细胞生长贴壁超过表面积75%。
绒毛膜标本在处理之前应以显微镜观察母体细胞污染情况,如果没有母体细胞污染可以直接当天处理,否则应先人工尽量去除所有母体细胞。
如果细胞到达实验室当天不能提取核酸,可放置2-8℃,次日处理。
培养细胞标本到达实验室后,应首先在2h之内以倒置显微镜观察其生长情况,如果贴壁超过75%,可立即处理标本,提取核酸,否则应要求实验室继续培养细胞。
骨髓标本
骨髓标本多用于血液系统疾病的分子生物学检查,如染色体核型分析、融合基因检测、FISH检测等,由临床医师无菌操作进行骨髓穿刺采集。
尿液样本
尿液样本也是临床分子诊断中常用的标本类型之一,主要用于感染性疾病的分子诊断,如某些病毒和细菌感染可通过尿标本进行检测
在患者留取尿液标本之前,实验室工作人员、医师或护士需对患者进行指导,给患者介绍留取标本的正确方法及有关注意事项
男性清洁中段尿标本采集流程见图3,女性清洁中段尿标本采集流程见图4.
图3
图4
粪便标本
粪便标本主要用于某些感染性疾病的临床分子诊断,也有进行肿瘤的临床分子诊断,其标本采集与粪便一般检验的采集方法一致
留取新鲜的自然排出的粪便3-5g,必要时可肛拭子采取,放入干燥、清洁、无吸水性的有盖容器内,贴好标识送检。
尿道及宫颈标本
尿道或宫颈分泌物是泌尿生殖道微生物感染检测常用的标本。
男性一般在尿道口采集标本,采集流程见图5,女性分为尿道及宫颈分泌样本,采集流程见图6.
图5
图6
痰液样本
1. 自然咳痰法
晨痰为佳,患者清晨起床后,用清水反复漱口后用力自气管深部咳出第一口痰于灭菌容器内,立即送检。
对于痰量少或无痰的患者可采用雾化吸入加温至45℃的10%NaCI水溶液,使痰液易于排出。
2. 支气管镜采集法
支气管镜在肺内病灶附近用导管吸或支气管刷直接取得标本,该方法在临床应用有一定困难。
3. 小儿取痰法
用弯压舌板向后压舌,用无菌棉拭子伸入咽部,小儿经压舌刺激咳嗽时,可喷出肺部或气管分泌物粘在棉拭子上,立即送检。
痰标本应加盖,避免痰中微生物的散播,采集标本应及时送检,如不能及时送检时应置于2-8℃保存,用于感染性疾病分子诊断的痰标本应尽量在抗生素使用前采集。
支气管肺泡灌洗液标本
局部麻醉后将纤维支气管镜插入右肺中叶或左肺舌段的支气管,将其顶端契入支气管分支开口,经气管活检孔缓缓注入37℃无菌生理盐水,每次20-50ml,总量100-300ml。
每次注液后以一定的负压吸出,其中第一次吸出的灌洗液弃去,收集之后的灌洗液于无菌容器中,根据不同的检查项目贴好标签并立即送检。
用于感染性疾病分子诊断的标本应尽量在抗生素使用前采集。
其他标本
除常见标本外,浆膜腔积液、脑脊液、分泌物样本等也用于临床分子诊断,例如肺癌或其他肿瘤肺转移时,胸腔积液、腹水中肿瘤细胞可以用于取代活检组织进行检测。
此外,感染性疾病时,胸腔积液、腹水、脑脊液、痰及某些分泌物标本可用于病原体核酸检测,辅助临床诊断。
胸腔积液、腹水标本一般由临床医师进行局部麻醉后经胸膜腔穿刺术采集,脑脊液通常由临床医师通过腰椎穿刺术收集,也可以由颈椎或脑池横向穿刺来获得
一般脑脊液穿刺同时需先测定颅内压,胸腹积液、腹水和脑脊液如果需要同时进行多项检测时,一般第1管用于微生物检测,对于所有无菌部位的标本采集,无菌操作是强制要求的。
参考:李艳 李金明 《临床分子诊断分析前与分析后》科学出版社
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