基因编辑小鼠如何分类?
基因编辑小鼠可分为三大类、7 小类:
(1)转基因(Tg)首先构建表达载体,包含启动子、增强子、编码区、polyA 等元件,然后将表达载体注入到受精卵的细胞核内,外源表达载体将插入到受精卵的基因组内,再将该受精卵移植到受体母鼠输卵管内,发育成为小鼠个体,该小鼠就会表达转入的外源基因。
(2)基因全身性敲除(KO)利用 Crispr/Cas9 系统,在受精卵的目标基因的编码区两侧分别切断,然后受精卵在连接断口的过程中,会丢失掉断口之间的序列(即编码区)。该受精卵移植到受体母鼠输卵管内,发育成为小鼠个体,该小鼠将无法表达目标基因,导致目标基因将完全失去活性,表现为全身性基因敲除。
(3)基因敲入(KI)首先构建打靶载体:包含同源臂和外源基因,然后将表达载体通过显微注射的方法注入到受精卵的细胞核内,同时利用 Crispr/Cas9 系统,在受精卵目的基因位置切断基因组 DNA,受精卵会通过同源重组将外源基因定点整合到基因组内。该受精卵移植到受体母鼠输卵管内,发育成为小鼠个体,该小鼠就携带了转入的外源基因。
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