化学发光免疫分析中常用化学发光试剂有哪些?
化学发光免疫测定是目前发展和推广应用最快的免疫分析方法,也是目前最先进的标记免疫测定技术,灵敏度和精确度比酶免法、荧光法高几个数量级,可以完全替代放射免疫分析、彻底淘汰酶联免疫分析。主要具有灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉、试剂稳定且有效期长(6-18个月)、方法稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高等等优点。
用作标记的化学发光试剂应符合的条件
鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是较常用的标记发光剂,它们符合以下几种条件:
1、能参与化学发光反应。
2、与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。
3、偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。
4、应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。
化学发光免疫分析中所使用的标志物分类
(一)直接化学发光剂
直接化学发光剂指的是直接用化学发光剂标记抗原或抗体,主要有如下几种。
1、吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm的光,具有很高的发光效率,其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。吖啶酯类发光剂可直接用于标记半抗原和蛋白质等。用于标记抗体时,结合稳定,结合后并不减少光量子的产生,可获得较高的比活性,有利于双位点化学发光免疫分析的建立,吖啶酯是较为理想的发光底物。
2、三联吡啶钌 三联吡啶钌是电化学发光剂,它和电子供体三丙胺(TPA)在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。
(二)酶促反应发光剂:利用标记酶(辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)的催化作用,使发光剂(底物)发光。
1.辣根过氧化物酶催化的发光剂为鲁米诺及其衍生物;除此之外还有异鲁米诺及其衍生物都有化学发光特性,鲁米诺是最早合成的发光物质。
2、碱性磷酸酶催化的发光底物为AMPPD,AMPPD 是一种新的化学发光剂,其分子结构中有两个重要部分,一个是连接苯环和金刚烷的二氧四节环,它可以断裂并发射光子;另一个是磷酸基团,它维持着整个分子结构的稳定。