大肠杆菌基因敲除甜菜碱转运蛋白ProP 和ProVWX提高苏氨酸产量

甜菜碱是一种渗透压保护剂,已被用于大肠杆菌生产苏氨酸,甜菜碱可通过proP编码的ProP或proVWX编码的ProVWX转运,也可以通过betABIT编码的酶在大肠杆菌中合成。然而ProP、ProVWX和betABIT对大肠杆菌生产苏氨酸的影响尚未研究。

近日,江南大学王小元以通讯作者的身份在Microbial Cell Factories发表文章“Improving l-threonine production in Escherichia coli by eliminationof transporters ProP and ProVWX”,构建了几株高效生产L-苏氨酸的大肠杆菌菌株用来探讨渗透压对菌株产生苏氨酸的影响。首先作者通过外源添加甜菜碱略微促进了细胞生长并提高了苏氨酸产量。接着敲除betABIT会抑制细胞的生长,降低其生长速率和苏氨酸产量。然而敲除proP和proVWX会显著增加苏氨酸产量,改造菌TSW003发酵36h后产生23.5g/L苏氨酸,进一步敲除crrptsG分别构建TSW008(发酵36h产量25.0g/L)和TSW009(发酵48h产量25.9 g/L),产率分别为0.69g/L/h和0.54g/L/h,虽然提高了苏氨酸的产量但会导致严重的生长缺陷。

该研究证明敲除proP和proVWX后,葡萄糖摄取系统和NADH合成转录水平升高,这意味着更多的能量可能对苏氨酸的产量起重要作用。进一步敲除crrptsG两个基因后没有得到明显的增产效果,导致生长严重放缓。这可能是因为敲除proP和proVWX后细胞对PTS系统的依赖性有关。
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