新冠SARS-Cov-2假病毒及突变株实验技术服务

新冠病毒引起的疫情已经在全球造成数千万人感染，SARS-COV-2突刺（Spike）糖蛋白通过结合宿主细胞表面ACE2受体感染宿主，当前新冠病毒在全球已经发生多个突变株，已为全球疫情防控及人类健康带来全新的挑战，对其感染机制及特性的研究需要更加深入。科学家通常需要在BSL-3实验室（P3）条件下操作活新冠病毒进行效价测定或攻毒试验，极大提高了新冠有关的新药研发门槛，由于P3实验室资源非常稀缺，目前仍然处于等候排队的供不应求状态。

S蛋白重组假病毒（Pseudovirus）是一类重组改造反转录病毒，能够整合其他病毒囊膜糖蛋白来形成的具有外源性病毒囊膜，但仍保持着自身基因组特性。S蛋白重组假病毒可以应用于抗体效价检测或中和滴定实验，为广大科学家提供一个模拟新冠病毒作用机制的安全快捷平台。通过构建与新冠病毒有相同感染机制的高滴度的S蛋白重组假病毒，研究者可以在不依赖于BSL-3实验室条件下，迅速建立基于S蛋白重组病毒的高通量筛选平台，或构建一个新冠治疗或预防性药物的药效评价系统，有效助力广大科学研究工作者及新药开发者的研究进度，有利于进行快速安全的实验操作和降低早期研发成本。

保存要求

必须保存在-80℃左右，冻融会影响病毒滴度。若从-80℃取出，可放置在4℃或冰上操作，建议24小时使用完毕，若未按上述操作，会导致滴度下降或感染不理想。

生物安全预防措施

Biosafety Level 2 (BSL-2)或P2实验环境

实验操作流程

建议采用贴壁感染ACE2表达丰度比较高的细胞株进行感染实验，以96孔板为例进行目的细胞感染实验，如有必要可用无血清培养基稀释病毒原液。

第一天，准备细胞：96孔板接种若干孔细胞，每孔接种约1×104个细胞，每孔培养基体积100ul；进行病毒感染时，细胞融合度大约30-50%。

第二天，准备病毒并感染细胞：-80°C冰箱取出病毒先在冰上融化或者4°C融化，根据算好加入的病毒量稀释到培养基中，尽可能保证含有假病毒的培养基为最小体积，以获得最佳感染效果；

更换培养基：一般感染8-20h后将含有病毒的培养液更换为新鲜培养基；感染后注意观察细胞状态，如果假病毒感染对细胞有明显的毒性而影响到细胞状态，则建议在加入病毒4-6h后，更换新鲜培养基。

感染效率检测：一般感染48-72小时（推荐72小时感染），在倒置荧光显微镜下观察荧光，估计病毒感染目的细胞的效率；

温馨提示：根据感染效率结果，确定最适的假病毒感染用量；再开始正式的药物筛选实验；